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鹅(Goose)黄体生成素(LH)ELISA试剂盒
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鹅(Goose)黄体生成素(LH)ELISA试剂盒

上海优选生物
YX-E1208G
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96T

鹅(Goose)黄体生成素(LH)ELISA试剂盒

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商品参数
  • 品牌:上海优选生物
  • 货号:YX-E1208G
  • 种属齐全:现货优惠
  • 规格:96T
商品描述

鹅(Goose)黄体生成素(LH)ELISA试剂盒



鹅(Goose)黄体生成素(LH)ELISA试剂盒 




检测原理;

试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被谷氨酸(GLU)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的竞争抗原,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷氨酸(GLU)呈负相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。


样品收集、处理及保存方法;

1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。


自备物品;

1.酶标仪(450nm)

2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱


操作注意事项;

1.   试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3.   按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.   所有液体组分使用前充分摇匀。


鹅(Goose)黄体生成素(LH)ELISA试剂盒组成;



鹅(Goose)黄体生成素(LH)ELISA试剂盒组成名称

96孔配制

48孔配制

备注

微孔酶标板

12*8

12*4

标准品

0.3ml*6

0.3ml*6

样本稀释液

6ml

3ml

检测行体-HRP

10ml

5ml

20*洗涤缓冲液

25ml

15ml

按照说明书进行稀释

底物A

6ml

3ml

底物B

6ml

3ml

终止液

6ml

3ml

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1


操作步骤;

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的竞争抗原50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。


结果判断;

1.  15分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;

2.  百分结合率计算:设S0管计数为B0,各标准管或样品管计数为B,非特异管计数为NSB,则百分结合率计算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%

3.  logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

4.  将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除,为标准点的百分结合率,在log-logit坐标纸上绘图。

5.  Log-logit双对数标准曲线:坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位,第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比(1-99),即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上,同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率,再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点,此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度,无须换算。

6.  人工处理:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标,对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直线)。根据待测样

品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸,查出的数值应取反对数才是最后的浓度值。

7.  自动处理:使用logit-log或四参数数据处理模式,由电脑自动计算得出结果。

8.  敏感度:1.0 μg/ml

9.  图例;


免责声明;

1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

  严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。


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