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土壤中纤维素酶含量检测
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-04-25 | 14 次浏览 | 分享到:

纤维素酶是一种酶,一种能够分解纤维素的催化剂,可以将纤维素分解成寡糖或单糖。它广泛的存在自然界的生物体内,比如细菌、真菌、动物体内等都会产生纤维素酶。细菌产生的纤维素酶量比较少,主要是葡聚糖内切酶,吸附在细胞壁上,比较难以提取。纤维素酶并不是单体的酶类,而是一种复合酶,包括外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等。纤维素酶能够破坏细胞壁,检测纤维素酶的含量,就是通过它的作用前后的变化来定量测定。



根据纤维素酶的催化功能,可以分为内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶。内切葡聚糖酶随机切割纤维素多糖链内部的寡糖和新链的末端,而外切葡聚糖酶只能切割还原性的和非还原性的纤维素多糖的末端,释放出葡萄糖或纤维二糖。外切葡聚糖,也称为β-葡萄糖苷酶。在纤维素酶的作用下,植物会被氧化分解,甚至会霉变腐烂。但是,植物体内也有抑制纤维素酶的物质,比如酚类化合物被氧化成醌类化合物,能够抑制纤维素酶的活力。



纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸(DNS)还原,生成棕红色的氨基化合物,在540nm 波长处有最大光吸收,在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系,利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。



除了分光光度法外,还有滴定法和高效液相色谱(HPLC)法。滴定法,就是利用纤维素酶对纤维素底物的降解作用,使得底物溶液的某个物质产生变化,通过滴定的方法来测定底物的变化,根据消耗的情况来计算出样品中含有纤维素酶的含量。HPLC法是一种高灵敏度、高精确度的检测方法,主要是利用对标准品的定量检测,利用标准曲线的方法,计算出样品中的纤维素酶含量。这种方法比较复杂,一般在科研检测实验室中使用比较多。


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