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高粱多酚含量的检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-04-11 | 17 次浏览 | 分享到:

多酚,别名叫植物单宁。多酚存在植物体内,比如蔬菜、坚果、大豆、茶叶、可可等。特别是可可豆中,多酚的含量尤其高。多酚是巧克力的灵魂,具有天然的抗氧化能力,多样的生物活性被用于保健或疾病预防方面。常见的多酚存在形式有可可多酚、葡萄多酚、洋葱多酚、绿豆多酚等。



对高粱多酚进行检测,具有重要的理论意义和应用价值。常用的多酚检测方法包括分光光度法,高效液相色谱(HPLC)法,参考茶多酚检测方法。


1.分光光度法


做实验之前,都要做好准备工作。准备什么?知道实验的方法和流程,准备哪些设备,配置哪些溶液。这里所需要的试剂有高粱样品、乙醇、Folin-Ciocalteu试剂、5%碳酸钠溶液和蒸馏水。设备包括分光光度计、移液器、离心机等。



知道检测的顺序,就基本上掌握了操作的方法了。这里,要对样品进行处理。先将高粱研磨成粉末,精准称量,并加入乙醇中摇匀,离心沉淀。收集上清液,这里的成分有很多,可以待定为高粱多酚提取物。


下面,就要知道这里这么多成分,怎么辨别出来多酚有多少呢?取以上的提取液,加入福林酚试剂,再加入5%碳酸钠溶液,混合均匀。待反应达到平衡后,在波长为760 nm处使用分光光度计测量吸光度。先用多酚标准品至少6个点的梯度稀释,根据测定的吸光度和浓度之间的关系,制作出标准曲线。


最后,计算高粱多酚含量。根据已知的高粱多酚标准曲线,将所得吸光度值代入曲线方程中,即可计算出高粱多酚的含量。标准曲线的制备可通过使用已知浓度的高粱多酚标准溶液,并按照上述方法进行检测和测量。


2.高效液相色谱(HPLC)法


样品制备:取适量高粱样品,研磨成粉末,精准称量。加入适量甲醇,超声并离心提取上清液。



标准品制备:使用HPLC检测多酚含量,是需要有标准品作为参照的。这里对标准品要用甲醇溶液进行梯度的稀释,稀释多少个点呢,看具体的操作步骤和方法要求,上机检测。


液相检测:这里要做的是,确定HPLC的色谱柱,调整柱温箱的稳定,进样量,配置流动相,检查对应的检测器,以保证实验可以顺利的进行并读取有效数据。


结果分析:根据色谱图的峰高、峰面积,使用标准曲线,计算样品中的多酚含量。


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