豆甾醇主要来源于大豆、玉米、燕麦、花生等油料农作物,属于一种植物甾醇。化学式为C29H48O,易溶于醋酸乙酯,苯,氯仿等有机溶剂,微溶于丙酮和乙醇,几乎不溶于水。豆甾醇含有多个羟基,可通过氢键和自由基结合,抑制氧化应激,如提升超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性,减少细胞氧化损伤。抑制炎症因子(如IL-6,TNF-α)的生成,减轻炎症反应。
豆甾醇主要来源于大豆、玉米、燕麦、花生等油料农作物,属于一种植物甾醇。化学式为C29H48O,易溶于醋酸乙酯,苯,氯仿等有机溶剂,微溶于丙酮和乙醇,几乎不溶于水。豆甾醇含有多个羟基,可通过氢键和自由基结合,抑制氧化应激,如提升超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性,减少细胞氧化损伤。抑制炎症因子(如IL-6,TNF-α)的生成,减轻炎症反应。
检测样本中的豆甾醇的含量,主要方法包括高效液相色谱(HPLC),气相色谱(GC)等。以HPLC为例,简单的介绍一下流程。如要实验操作,可参考相关的文献资料或操作规程,确保有成功的案例可依据。
1.样品处理
将植物的样本进行粉碎过筛处理,加入乙酸乙酯进行超声提取,定容,最后进行膜过滤。
2.色谱条件
C18的色谱柱,250mm或150mm长,4.6mm内径,5um粒径。柱温为室温。以乙腈-水或甲醇-水(97:3)为流动相,等度洗脱。紫外检测器,波长210nm或蒸发光散射检测器(ELSD)。流速0.8-1ml/min,进样量10-20uL。仅供参考,在实际操作过程中,需要结合样本的特性或周边环境进行设置。如果色谱峰出现不规则的情况,需要适当的调整。
3.标准曲线
标准曲线是通过梯度稀释的6个标准溶液浓度点,对应它的色谱峰面积,在表格中拟合出来的。同时,保证标准曲线过坐标轴的原点,上方的回归方程相关系数r2大于0.999,并接近于1。
4.含量测定
样本溶液进到HPLC中,根据标准品色谱峰的保留时间,可以找到豆甾醇的色谱峰。外在的色谱条件都没有变化,出峰的时间也不会变的。对这个样本的色谱峰面积进行积分,并代入到回归方程,可计算出样本溶液中的豆甾醇含量。