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单胺类神经递质及代谢物测定
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-06-18 | 38 次浏览 | 分享到:
单胺类神经递质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺、5-羟色胺(5-HT)、组胺等。5-HT的代谢产物有5-羟吲哚乙醛,5-羟吲哚乙酸。多巴胺经过单胺氧化酶(MAO)和儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)逐步转化为高香草酸。NE的代谢产物是3-甲基-4羟-苯乙二醇。组胺的代谢产物有甲基组胺,咪唑乙醛,N-甲基吲哚乙酸等。

单胺类神经递质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺、5-羟色胺(5-HT)、组胺等。5-HT的代谢产物有5-羟吲哚乙醛,5-羟吲哚乙酸。多巴胺经过单胺氧化酶(MAO)和儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)逐步转化为高香草酸。NE的代谢产物是3-甲基-4羟-苯乙二醇。组胺的代谢产物有甲基组胺,咪唑乙醛,N-甲基吲哚乙酸等。


这里以组胺为例,实验室定量检测方法,主要包括高效液相色谱(HPLC),液相色谱串联质谱(LC-MS/MS),酶联免疫吸附(ELISA)法等。


1.样品前处理


称取样品5g放置于50ml的离心管中,加入0.4mol/L的高氯酸,振荡摇匀1min,进行萃取,静置,离心,衍生等过程处理。


2.色谱条件


C18的色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径,柱温30℃;以0.01mol/L醋酸铵和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1ml/min,进样量10-20uL;紫外检测器,波长254nm。仅供参考,根据实验环境和样品的实际情况进行调整参数。根据出峰的结果,继续优化色谱条件。


3.标准曲线


称取组胺标准品1mg,溶解于0.1mol/L的盐酸溶液中,转移到10ml的容量瓶中,定容至刻度,配制成0.1mg/mL的组胺标准溶液储备液,和样品一样也是需要衍生化处理的。逐步梯度的稀释成0.001,0.0025,0.005,0.01,0.015,0.025,0.05mg/mL的标准溶液。依次进样到HPLC中测出各个浓度点的色谱峰,记录保留时间,对峰面积进行积分,拟合标准曲线,得到回归方程。


4.样品含量计算


标准曲线的浓度点范围,尽可能的覆盖到样品的浓度。将样品溶液进样到HPLC中,测出色谱图,根据保留时间识别出组胺的色谱峰。对色谱峰进行积分处理,代入到回归方程,是可以计算出样品溶液的组胺含量。有的地方,需要考虑加标回收率,重复性等。


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