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肌苷酸含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-06-17 | 44 次浏览 | 分享到:
肌苷酸(IMP)是一种在RNA中发现的核苷酸,在酶的作用下可分解为次黄嘌呤。经过科研证明,肌苷酸是一种风味的核苷酸,通常情况下是由肌肉中的ATP降解而产生的。肌苷酸被广泛的应用在调味品和医疗等领域,用于能量传递和合成,信号调控,代谢中间产物等。

肌苷酸(IMP)是一种在RNA中发现的核苷酸,在酶的作用下可分解为次黄嘌呤。经过科研证明,肌苷酸是一种风味的核苷酸,通常情况下是由肌肉中的ATP降解而产生的。肌苷酸被广泛的应用在调味品和医疗等领域,用于能量传递和合成,信号调控,代谢中间产物等。


检测样本中的肌苷酸(IMP)含量,实验室一般采用高效液相色谱(HPLC)或液相色谱质谱联用(LC-MS)法等。以HPLC为例,简单的介绍一下检测过程。


1.样品处理


称取0.2g的样本,放入到2ml的离心管中,加入1ml的2.5%高氯酸,振荡1min。低温超声20min,13000r/min离心20min,取上清液0.45um膜过滤,待测。


2.色谱条件


C18色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径;柱温25℃,0.035mol/L的磷酸二氢钠(pH=6.8)为流动相,等度洗脱。流速1ml/min,进样量10uL。紫外检测器,波长259nm,仅供参考。


3.标准曲线


精确称取肌苷酸(IMP)10mg到10ml的容量瓶中,加入超纯水定容,得到1mg/ml的标准母液,在-20℃避光保存。梯度稀释6个浓度点,最低点在定量限,确保范围可能在样品的范围内。记录各个标准溶液的浓度值,依次进样到HPLC中,测出来各个点的色谱峰,记录保留时间,并对各个峰的峰面积进行积分。对应峰的浓度点,可拟合出标准曲线,得到回归方程。


4.样品含量计算


将样品溶液进样到HPLC,根据出峰的情况和保留时间,判断出目标峰的位置。对肌苷酸(IMP)的色谱峰的面积进行积分,并代入到回归方程,得到样品溶液中的肌苷酸(IMP)含量。


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