槐果碱是一种生物碱类化合物,来源于豆科植物苦参的干燥根。槐果碱的化学式为C15H23BrN2O,分子量327.27,可溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙酮和苯,微溶于水,易溶于稀酸。在科研的领域,具有抗炎、镇痛、抗病毒、调节免疫、抑制中枢神经等作用。
槐果碱是一种生物碱类化合物,来源于豆科植物苦参的干燥根。槐果碱的化学式为C15H23BrN2O,分子量327.27,可溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙酮和苯,微溶于水,易溶于稀酸。在科研的领域,具有抗炎、镇痛、抗病毒、调节免疫、抑制中枢神经等作用。
常用的检测方法:高效液相色谱(HPLC)、液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)等。以HPLC为例,简单的介绍一下检测流程。
1.样品处理
称取0.2g样品,放到具塞的锥形瓶中,加入20ml的乙腈-0.1%磷酸(13:87)(三乙胺调节pH值到8.0,下同)溶液,称重一下并记录。接着,进行超声波处理,功率300W的话,可设置45Hz的频率,超30min,放冷。用乙腈-0.1%磷酸溶液补足减少的重量,过滤,待测。
2.色谱条件
C18的色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um的粒径,30℃的柱温。流动相以甲醇和0.2%磷酸水,或乙腈和0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱。紫外检测器,波长205-220nm。流速1ml/min,进样量10uL。仅供参考。
3.标准曲线
精确的称取槐果碱的标准品,加入流动相,制成20ug/mL的标准母液,再对它进行梯度的、成倍的稀释6个浓度点。最低点在检测器的有效范围内,也就是定量限。尽可能的覆盖到样品溶液的有效范围内。依次进样到HPLC中,测出各个浓度点的色谱峰。对各个色谱峰的保留时间进行记录,并对它的峰面积进行积分处理。将峰面积和对应它的标准溶液浓度,在表格中可拟合出标准曲线,得到回归方程,确保线性的有效性,重复性在可接受范围内。
4.样品含量
测定样品的含量,就是在和标品相同的色谱条件下,测出样品的色谱峰。通过标品的保留时间,可识别出目标化合物的色谱峰。对这个色谱峰的面积进行积分,然后代入到回归方程,就可以得到样品溶液的槐果碱含量。这个不是样品中的槐果碱含量,需要进一步的考虑稀释倍数,从而获得更准确的含量计算。