番泻苷是从豆科植物番泻中提取出来的一种天然蒽醌类有机物,常见的成分包括番泻苷A和番泻苷B,一般需要经过肠道细菌的分解后才能转化为活性物质。番泻苷A和B的化学式都是C42H38O20,分子量方面有一点点的差别。如番泻苷A的分子量是862.74,而番泻苷B的分子量是863.74,差1个质量单位。番泻苷A不溶于水、苯、醚和氯仿;微溶于甲醇、丙酮和二氧六环;溶于碳酸氢钠水溶液。番泻苷B不溶于水,微溶于甲醇和二甲基亚砜(DMSO),溶于二氧六环和甲醇。在科研角度来说,它可以刺激肠道神经,增强肠道蠕动,并抑制水分吸收。
番泻苷是从豆科植物番泻中提取出来的一种天然蒽醌类有机物,常见的成分包括番泻苷A和番泻苷B,一般需要经过肠道细菌的分解后才能转化为活性物质。番泻苷A和B的化学式都是C42H38O20,分子量方面有一点点的差别。如番泻苷A的分子量是862.74,而番泻苷B的分子量是863.74,差1个质量单位。番泻苷A不溶于水、苯、醚和氯仿;微溶于甲醇、丙酮和二氧六环;溶于碳酸氢钠水溶液。番泻苷B不溶于水,微溶于甲醇和二甲基亚砜(DMSO),溶于二氧六环和甲醇。在科研角度来说,它可以刺激肠道神经,增强肠道蠕动,并抑制水分吸收。
检测方法:高效液相色谱(HPLC),液相色谱质谱联用(LC-MS)等。以番泻苷A为例,简单介绍一下HPLC测定的过程。
1.样品处理
将干燥的植物样本进行粉碎过筛处理,精密称量0.5g,放入具塞锥形瓶中,加入50%的甲醇30ml,超声30min,冷却后用50%甲醇补充足失去的重量。过滤,精确量取10ml到25ml容量瓶中,用50%甲醇定容,0.45um膜过滤,待测。处理的方法,不是固定不变的,根据样本的实际情况或环境进行调整。
2.色谱条件
C18的色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径;柱温25℃。以甲醇和0.5%磷酸溶液为流动相,等度洗脱,或乙腈-水-冰醋酸等度洗脱,流速1ml/min。紫外检测器,波长340nm,进样量10uL。理论塔板数不低于3000,仅供参考。
3.标准曲线
称取番泻苷A的标准品适量,使用50%甲醇溶解配制成1mg/mL的溶液。并进行梯度稀释成6个不同的浓度点,最低点和最高点要在检测器有效范围内,确保检测限。HPLC进样测出各个浓度的色谱峰,记录色谱峰的位置,并对色谱峰面积进行积分。对应它的标准溶液浓度,可以在表格中绘制出标准曲线,得到回归方程,相关系数r2>0.999。在必要的时候,计算重复性,精密度,加标回收率等。
4.样品测定和含量计算
将制备好的样品溶液,进样到HPLC,以和标准品相同的色谱条件,在软件中记录色谱峰。通过保留时间可以识别出目标的色谱峰,并对它的面积进行手工或自动积分。代入到回归方程,可以计算出番泻苷A含量。