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吲哚乙酸含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-04-07 | 56 次浏览 | 分享到:
吲哚乙酸,也称为吲哚-3-乙酸(AA),是一种植物生长素。吲哚乙酸在植物的幼嫩叶片和顶端分生组织中合成,通过韧皮部长距离传输。植物体内的生长素是由色氨酸通过一系列的代谢中间产物而形成的,主要途径是通过色氨酸通过氧化脱氨成为吲哚丙酮酸,而后脱羧而成吲哚乙醛,再氧化成吲哚乙酸。

吲哚乙酸,也称为吲哚-3-乙酸(AA),是一种植物生长素。吲哚乙酸在植物的幼嫩叶片和顶端分生组织中合成,通过韧皮部长距离传输。植物体内的生长素是由色氨酸通过一系列的代谢中间产物而形成的,主要途径是通过色氨酸通过氧化脱氨成为吲哚丙酮酸,而后脱羧而成吲哚乙醛,再氧化成吲哚乙酸。



生长素对植物的作用是比较微妙的,低浓度的时候可以促进生长,而高浓度的时候会抑制生长。生长素的分布比较广泛,主要集中在生长旺盛的地方,如胚芽鞘、芽、根顶端的分生组织、形成层、发育中的种子和果实等处。生长素在植物体内的运输有3种方式:横向运输,极性运输,非极性运输。


由于植物体内的吲哚乙酸含量并不是固定不变的,会随着气候,部位等变化。低浓度的生长素有利于植物生长,因此它的含量是微量的。检测方法,一般包括高效液相(HPLC),液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)等。


1.样本前处理


一般是植物的样本,,在液氮下研磨后充分混匀,加入异丙醇:水:甲酸(80:19:1)混匀。放在4℃的冰浴中超声1h,浸提液用10000r/min离心10min,得到上清液。再加入1ml二氯甲烷,低温超声提取30min,10000r/min离心10min得上清液。室温氮气减压至水相,定容至1ml,振荡混匀,用甲醇稀释2倍后过0.22μm滤膜,待测。



2.色谱条件


C18的色谱柱,2.1*100mm 1.7μm,柱温35℃;流动相A-0.1%甲酸水,B-乙腈,梯度洗脱,流速0.3ml/min。MS条件:气帘气35 psi,碰撞气7psi,离子喷雾电压+5500V、-4500V

离子模式 ESI±模式,离子源温度:450 °C(离子源气体)IonSource Gas1:40psi(离子源气体)IonSource Gas2:50psi


3.标准曲线


标准品梯度稀释6个浓度点,配制成标准工作液。将配制好的标准工作线依次上机测定,检测6个浓度点的质谱峰。根据质谱峰面积和对应浓度,绘制标准曲线,得的回归方程。


4.样品测定和计算


将处理后得到的待测液,上机检测,根据质控实验来确认目标峰保留位置,得到峰面积数据,根据内标标准曲线及样品稀释倍数,计算实际样品中的含量。


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