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苯丙氨酸含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-03-25 | 43 次浏览 | 分享到:
从营养学角度来说,苯丙氨酸是人体内不能自然合成,所以是必需的氨基酸之一。从化学性质来说,是一种有机化合物,属于脂肪族氨基酸。化学式为C9H11NO2,分子量为165.19,溶于水,难溶于甲醇,乙醇,乙醚。苯丙氨酸在生物体内,经过苯丙氨酸羟化酶的作用,氧化生成酪氨酸。苯丙氨酸和酪氨酸一起合成神经递质和激素,参与机体内的糖代谢和脂肪代谢。苯丙氨酸可以用于在医药,食品等领域。

从营养学角度来说,苯丙氨酸是人体内不能自然合成,所以是必需的氨基酸之一。从化学性质来说,是一种有机化合物,属于脂肪族氨基酸。化学式为C9H11NO2,分子量为165.19,溶于水,难溶于甲醇,乙醇,乙醚。苯丙氨酸在生物体内,经过苯丙氨酸羟化酶的作用,氧化生成酪氨酸。苯丙氨酸和酪氨酸一起合成神经递质和激素,参与机体内的糖代谢和脂肪代谢。苯丙氨酸可以用于在医药,食品等领域。



检测样品中的苯丙氨酸含量,主要包括高效液相色谱(HPLC)法,紫外分光光度法(UV-Vis),酶联免疫吸附(ELISA)法,薄层色谱法,电位滴定法等。


以HPLC为例,简单的介绍一下测试流程和注意事项。


1.样品处理


在生物实验中,检测氨基酸含量是相对普遍的。一般测17-20种氨基酸,通过对样品的处理,可以准确的测出含量。现在的方法,相对比较成熟。比如采用水解和衍生的方法,获得清晰的色谱图。


水解:用0.2g样品,加入2ml的6mol/L的HCL,振荡5min。之后,放入105℃的烘箱中水解24h,拿出来放到室温,HCL少的话补充点。这个时候,就要用6mol/LNAOH滴定到中性,用水定容到5mL,继续振荡5min。完成这个步骤后,用4000r/min离心10min,取上清液。


衍生:将水解后的上清液,吸取0.5ml,放到棕色离心管中,加入pH=9.0的NaHCO3溶液和DNFB各0.5ml,放入60±0.5℃水浴中,避光反应60min。取出立即用冷水冷却至室温,加入3.5ml pH=7.0磷酸缓冲溶液,充分混匀,室温避光反应15min,取上清液过0.22μm 滤膜,待液相色谱测定。



2.色谱条件


C18色谱柱:250*4.6mm,5μm,柱温38℃; 流动相:A:乙腈:甲醇=90:10   B:0.02mol/LNaH2PO4+Na2HPO4,1ml/min,梯度洗脱,DAD检测器,波长360nm;进样量20uL。


3.标准曲线



将标品稀释6个点的浓度,测出来各个点的色谱峰。对色谱峰面积进行积分,结合对应的浓度,绘制出标准曲线,得到回归方程。相关系数r2需要大于0.999,有的地方需要回收率,重复性,精密度等。


4.含量计算


根据样品测定出来的色谱峰面积,代入到回归方程中,计算出样品中的苯丙氨酸含量。


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