硫苷的全称是硫代葡萄糖苷,它是十字科蔬菜中的一种次生代谢产物。根据侧链基团的不同,可以分为脂肪酸,芳香族,吲哚族。硫苷的侧链结构种类比较多,有直碳链,支碳链,羟基,羰基等。硫苷的侧链R基团是不同的,当R基团为甲硫氨酸,丙氨酸,缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸的时候,它就是脂肪族硫苷;当R基团是苯丙氨酸和酪氨酸,为芳香族硫苷;当R基团为色氨酸时,为吲哚族硫苷。硫苷降解产物具有一定气味,具有杀菌杀虫的作用。
硫苷的全称是硫代葡萄糖苷,它是十字科蔬菜中的一种次生代谢产物。根据侧链基团的不同,可以分为脂肪酸,芳香族,吲哚族。硫苷的侧链结构种类比较多,有直碳链,支碳链,羟基,羰基等。硫苷的侧链R基团是不同的,当R基团为甲硫氨酸,丙氨酸,缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸的时候,它就是脂肪族硫苷;当R基团是苯丙氨酸和酪氨酸,为芳香族硫苷;当R基团为色氨酸时,为吲哚族硫苷。硫苷降解产物具有一定气味,具有杀菌杀虫的作用。
检测方法,有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、质谱(MS)法、分光光度法等。
以HPLC为例,简单的介绍一下检测过程和注意事项。
1.样品前处理
能不能测定出来样品中的硫苷,前处理是非常重要的。特别要考虑硫苷的物理和化学性质,参考过去的文献资料,有效的经验,可以获得相对准确可靠的方法。当然,并不是所有的经验都是有效的,就实际情况来判断和处理。处理样品的方法,是大同小异的。相同的是有粉碎,过筛,对应的有机溶剂,水浴,振荡,超声,离心,过滤,提取等。不同的是每个步骤的用量,浓度,时间,温度等都需要相对准确的参数,这样才能尽可能将目标化合物分离出来。进入溶液中,从而有利于后续的hplc测定含量。这一步是非常基础的,但也是很关键的。如果做不好,很可能会有很少或检测不出来,从而导致不准确的判断。

2.HPLC色谱条件
要对HPLC的结构和参数都非常的熟悉,比如,测什么化合物,就知道一定会用哪种色谱柱,什么流动相和检测器。如果是做方法开发,就要做条件优化设计,参照不同浓度和参数,得到最优化的参数组合。一般对于过去用过的,做一下方法验证或稍微优化点参数;如果是完全不熟悉的,就要重新设计,找到比较适合的色谱柱,流动相,检测器波长等。比如,采用C18的色谱柱,260mm长,4.6mm内径,5um粒径;以水和乙腈为流动相,梯度洗脱,1ml/min;紫外检测器,229nm;进样量10-20uL。

3.标准曲线
使用标准品,溶解定容后,进行梯度稀释5-7个点,一般选择6个浓度点。梯度稀释,并不是随意的稀释,而是要考虑到检测限。比如,检测器信噪比的5-10倍为最低点,这样就可以预先知道该怎么稀释。通过6个不同的浓度,进样到HPLC,测定出来各自的色谱峰。对峰面积进行积分处理,结合对应的浓度,用表格函数,可以得到标准曲线,回归方程,相关系数r2需要大于0.999。有的地方,要考虑到回收率,重复性,精密度等。
4.样品的测定
对样品的测定,有的时候比较顺利,有的时候要考虑流动相或色谱柱污染等问题。通过测定出来的色谱峰面积,代入到回归方程,就能计算出样品中的硫苷含量。
分光光度法可以参考GB/T 23890-2009《油菜籽中芥酸及硫苷的测定 分光光度法》