柠檬酸合成酶，也称为柠檬酸缩合酶。如果它要发挥作用，需要乙酰辅酶a和草酰乙酸作为底物。说来话长，这就要从三羧酸循环说起。柠檬酸合成酶催化乙酰辅酶a的乙基，和草酰乙酸的酮基结合，生成了柠檬酸辅酶a。这个时候，如果要得到柠檬酸，就要将柠檬酸辅酶a的辅酶a水解出来，生成柠檬酸进入三羧酸循环。这个过程包括底物的氧化、脱羧、还原等反应，受到ATP，NADH，琥珀酰辅酶a抑制。乙酰辅酶a和草酰乙酸是影响到柠檬酸合成速率。

检测方法包括分光光度法，酶联免疫吸附（ELISA）法等。

1.分光光度法

柠檬酸合成酶（CS）催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。梯度稀释，测定对应的吸光度值，去除对照，得到标准曲线，计算样品的柠檬酸合成酶的活性，也就是作用能力。样品的测定，为了确保更准确，可以多3个平行。

2.酶联免疫吸附（ELISA）法

采用的是双抗体夹心法，测定样品中的柠檬酸合成酶的含量。

用纯化的植物柠檬酸合成酶（CS）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物柠檬酸合成酶（CS），再与HRP标记的柠檬酸合成酶（CS）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物柠檬酸合成酶（CS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物柠檬酸合成酶（CS）活性浓度。