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植物过氧化氢酶(CAT)活检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-03-14 | 95 次浏览 | 分享到:
在植物的细胞体内是存在过氧化氢酶的,是能够将过氧化氢催化分解为氧和水。过氧化氢酶是抗氧化酵素的一员,以铁卟啉为辅基的结合酶。CAT的作用机制是将过氧化氢进行歧化,必须有2个H2O2分子先后和CAT相遇,并碰撞在活性中心上,才能发生反应。植物中主要存在于叶绿体、线粒体、内质网等部位。过氧化氢(H2O2)是细胞代谢中产生的代谢废物,对细胞有毒害作用。CAT能够消除体内的过氧化氢,让细胞免受H2O2的毒害。过氧化氢酶可以用于食品,纺织,美容等行业。

在植物的细胞体内是存在过氧化氢酶的,是能够将过氧化氢催化分解为氧和水。过氧化氢酶是抗氧化酵素的一员,以铁卟啉为辅基的结合酶。CAT的作用机制是将过氧化氢进行歧化,必须有2个H2O2分子先后和CAT相遇,并碰撞在活性中心上,才能发生反应。植物中主要存在于叶绿体、线粒体、内质网等部位。过氧化氢(H2O2)是细胞代谢中产生的代谢废物,对细胞有毒害作用。CAT能够消除体内的过氧化氢,让细胞免受H2O2的毒害。过氧化氢酶可以用于食品,纺织,美容等行业。



检测方法:分光光度法,滴定法等。


1.分光光度法


过氧化氢(H2O2)在240nm的波长处有紫外吸收特征,通过过氧化氢酶(CAT)催化H2O2分解,从而导致吸光度下降。通过对比过氧化氢前后吸光度的变化,可以计算出CAT的活性,即分解能力。


在这个过程中,实验条件对H2O2和CAT的作用影响比较大,对关键的步骤要注意操作。实验之前,要从植物中将过氧化氢酶给提取出来。通过加入缓冲液研磨,低温离心,获得上清液作为酶提取液。这个过程,既要能充分的将CAT提取出来,而且自始至终要保持应有的活性,也就是不能失活。



取一定的过氧化氢溶液,用磷酸缓冲液调整pH值到7.0,加入待测过氧化氢酶溶液,充分摇匀后,恒温反应,每隔一段时间测一次吸光度值,扣除空白对照。吸光度随时间的下降速率,进而确定 CAT 活性。


2.滴定法


滴定法是通过滴定反应中未分解的 H₂O₂ 来确定 CAT 活性。此方法中通常使用高锰酸钾(KMnO₄)溶液进行滴定。高锰酸钾可以氧化残留的 H₂O₂,滴定过程中 KMnO₄ 的消耗量可以反映 CAT 的活性。操作步骤可以参考相关的行业标准或团体标准,高锰酸钾滴定法。


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