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黄芩素含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-03-04 | 96 次浏览 | 分享到:
黄芩素,主要是存在于黄芩中而得名。它是黄芩的有效成分,是一种黄酮类化合物。化学式为C15H10O5,分子量为270.24,它是有3个环组成的,两个苯环(A环和B环)和一个含氧杂环(C环)。在280-340 nm有强吸收。溶于甲醇,乙醇,丙酮,醋酸乙酯和热冰醋酸,微溶于水。分子中含有多个羟基,具有抗菌,消炎,抗氧化,改善血液循环,清除体内热毒等作用。

黄芩素,主要是存在于黄芩中而得名。它是黄芩的有效成分,是一种黄酮类化合物。化学式为C15H10O5,分子量为270.24,它是有3个环组成的,两个苯环(A环和B环)和一个含氧杂环(C环)。在280-340 nm有强吸收。溶于甲醇,乙醇,丙酮,醋酸乙酯和热冰醋酸,微溶于水。分子中含有多个羟基,具有抗菌,消炎,抗氧化,改善血液循环,清除体内热毒等作用。



检测样品中的黄芩素含量,实验室的方法有分光光度法,高效液相色谱(HPLC)法,液相色谱质谱联用(LC-MS)法,薄层色谱(TLC)法等。这里以HPLC为例,简单的介绍一下检测过程,仅供参考。


1.样品处理


如果是植物样本,就可以打碎成粉末。精密称取5mg,倒入25ml的容量瓶中,加入适量的甲醇,进行超声溶解。冷却到室温的时候,用甲醇进行稀释定容到刻度,摇匀。用0.45um的滤膜过滤,待测。



2.色谱条件


C18的色谱柱,250mm长,4.6mm内径,粒径5um,柱温30-35℃;以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相(梯度洗脱)或甲醇/乙腈-水,流速1.0ml/min;紫外检测器,波长280nm;进样量10-20ul。



3.标准曲线


在处理样品的时候,也需要处理一下标准品。比如,称量2mg的黄芩素,在10mg的容量瓶中,用甲醇超声溶解,冷却到室温,定容即可。标准曲线,是由坐标轴上的5-7个点连接在一起形成的一条近似直线。那么,稀释的第一个点比较重要,也是标曲的最低点。一般是选择信噪比的5-10倍,获得相对优良的线性。依次,成倍的梯度稀释。通过以上的色谱条件,测出对应的色谱峰。对色谱峰面积进行积分,对应标准溶液的浓度,绘制标曲,得到回归方程,相关系数r2要大于0.999。


4.样品测定


当有了标准曲线,就可以通过样品的色谱峰面积,计算出样品中的黄芩素含量。样品测定的条件,要和标准品一样的,避免造成误差。同时,有的需要考虑回收率,重复性等。从而确保实验结果的真实,可靠。


质谱法通过质谱检测黄芩素的分子离子峰,内标或标准曲线的方法,计算出样品中的黄芩素含量。


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