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苦杏仁酸测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-01-03 | 192 次浏览 | 分享到:

苦杏仁酸,主要是从苦杏仁中提取出来的,也称为扁桃酸。属于脂溶性的有机酸,化学式为C8H8O3,分子量152.15,易溶于热水,乙醚,异丙醇和乙醇。也可以通过人工合成的方法制备,比如苯乙酮法,苯乙醛酸法,苯甲醛转移法等。苦杏仁酸能促进新陈代谢,补充营养,改善皮肤。在医药工业上,可以用于制造医药中间体。


检测苦杏仁酸的方法有很多,实验室法有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、质谱(MS)法、薄层色谱法、分光光度法,酶联免疫吸附法等。


1.气相色谱(GC)法


气相色谱,测苦杏仁酸含量。需要先将样品处理,主要包括提取,纯化等步骤。剩下的就是气相部分,它包括色谱柱,流动相,色谱柱。一般情况下,测苦杏仁酸,用氢火焰离子检测器(FID),使用聚乙二醇(PEG)或甲基硅氧烷为色谱柱的固定相。硬件部分是这些,更重要是操作参数的变化。包括柱温,载气流量,进样量,检测器参数等。为了更准确的检测,有的地方会采用GC-MS联用的形式,从而获得更准确的含量。



2.高效液相色谱(HPLC)法


前处理:用甲醇或乙腈为溶剂,混合后,超声波溶解,离心提取。过程是这样的,操作需要按照规定的参数进行。


色谱条件:C18色谱柱,柱温室温;乙腈,水和醋酸为流动相,流速1.0ml/min;紫外检测器,波长220nm。也有用蒸发光散射检测器,荧光检测器。进样量10ul,仅供参考。一般有标准的方法,也有自己开发的。在使用之前,是需要验证的,获得准确的检测效果。



标准曲线:有用内标法的,也有用外标的,即标准曲线的方法。


质谱法,一般是和高效液相色谱(HPLC)联用的,通过测定质谱峰,定量计算出含量。


3.酶联免疫吸附(ELISA)法



该检测方法采用双抗体夹心法来测定标本中苦杏仁酸的含量。使用纯化的苦杏仁酸捕获抗体包被微孔板,形成固相抗体。然后,向包被的微孔中加入待测样本,样本中的苦杏仁酸会与固相抗体结合。接着,加入HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。通过彻底洗涤后,加入底物TMB进行显色反应。TMB在HRP酶的催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下最终变成黄色,颜色的深浅与样品中苦杏仁酸的浓度有相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,通过标准曲线计算样品中苦杏仁酸的含量。


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