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二十二碳六烯酸检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-12-24 | 209 次浏览 | 分享到:
DHA,即二十二碳六烯酸,是一种人体必需的多不饱和脂肪酸,主要通过食物补充。它对脑细胞发育、血液循环改善、抗衰老和降血脂有重要作用。DHA的提取方法包括尿素包合、超临界流体萃取、己烷溶剂液液萃取和真菌发酵等。检测DHA的方法有气相色谱(GC)法、高效液相色谱(HPLC)法、液相质谱联用(LC-MS)法和酶联免疫吸附(ELISA)法。GC法通过气体流动相分离样品中的化合物,HPLC法通过乙醇-水溶解样品并进行甲酯化处理,LC-MS法结合液相色谱和质谱技术,ELISA法则通过抗体结合和颜色反应检测DHA含量。

二十二碳六烯酸,简称为DHA,是人体所需的一种多不饱和脂肪酸。分子式为C22H32O2,分子量328.48。分子结构中含有22个碳原子和6个双键的直链脂肪酸。在体内代谢的过程中,可由α-亚麻酸生成,主要是靠食物补充的。DHA辅助脑细胞发育,改善血液循环,抗衰老,降血脂等。提取的方法,包括尿素包合,超临界流体萃取,己烷溶剂液液萃取,真菌发酵等。


检测方法包括气相色谱(GC)法、高效液相色谱(HPLC)法、液相质谱联用(LC-MS)法、酶联免疫吸附(ELISA)法等。


1.气相色谱(GC)法


GC的流动相是气体,通过样品在色谱柱和流动相之间的分配系数差异,逐步将样品中的化合物分离出来,通过检测器读取信号,在软件中以色谱峰的形式记录。通过内标或标准曲线的方式,计算出样品中的DHA含量。常用于检测血液,鱼油,微藻等样品中的DHA含量。



检测包括样品前处理,色谱条件设置,上机测定,标准曲线,结果计算等过程。


2.高效液相色谱(HPLC)法


前处理方法:将样品用乙醇-水溶解,加入2%氢氧化钠-甲醇溶液,水浴1.5h。通过液液萃取或固相萃取等方法去除杂质,使用旋蒸的方法将溶液浓缩,将浓缩后的样品进行甲酯化处理,生成容易检测到的酯类化合物。



色谱条件:


依然用C18的色谱柱,柱温一般是室温或25℃;流动相,通常情况下,使用甲醇/乙腈和水,流速为1.0ml/min;紫外检测器,波长205nm或根据实际情况调整。进样量一般会选择10ul。


标准曲线:


使用标准品,进行成倍的,梯度稀释,至少6个点。测定色谱峰,对峰面积进行积分处理。结合对应的标准溶液浓度,绘制标准曲线,得到回归方程。


计算结果:


采用同样的色谱条件,测定样品的色谱峰。结合色谱峰面积的积分,标准曲线,可以计算出样品中的DHA含量。


3.液相色谱-质谱联用法(LC-MS)



结合液相色谱和质谱技术的优点,能够高效、精准地检测DHA的含量变化。这种方法,适用于复杂化合物的样品分析。


4.酶联免疫吸附法(ELISA)


往预先包被二十二碳六烯酸(DHA)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的二十二碳六烯酸(DHA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。


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