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植物信号分子检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-12-19 | 173 次浏览 | 分享到:
信号分子是植物体内的化学分子,用于细胞内或细胞间传递信息。根据溶解性可分为亲水性和亲脂性,主要特点是特异性、高效性和可被灭活。检测方法包括化学分析和电化学。化学分析通过提取和分离信号分子,利用气相色谱、液相色谱等技术进行检测。电化学方法通过测量电化学反应中的电位变化来检测信号分子。电泳法则通过破坏蛋白质结构,根据分子量进行分离。

信号分子是植物体内的一些化学分子,它们的作用是在细胞内或细胞间传递信息。一般情况下,将细胞外的信号分子称为“第一信使”,如植物激素等。在细胞内传导信号的称为“第二信使”,如cAMP,cGMP,IP3,Ca2+等。根据信号分子的溶解性,可分为亲水性和亲脂性。信号分子的主要特点是特异性,高效性,可被灭活。信号分子有很多种类,包括蛋白质,氨基酸衍生物,胆固醇,脂肪酸衍生物等。



检测方法,主要包括化学分析、电化学等。


1.化学分析


首先,要从植物样品中将信号分子提取出来。利用信号分子的化学性质,比如非极性的信号分子,用正己烷,石油醚等溶剂;极性的信号分子,用乙酸乙酯,醇等溶剂。分离的方法有气相色谱,液相色谱,电泳,质谱等。根据信号分子的物理性质,比如分配系数,吸附,渗透等能力不同而分离。电泳方法,也可以根据电荷和分子量进行分离。LC-MS可以对化合物进行更准确的检测,确定其化学结构和分子量。



例如,HPLC测信号分子含量。样品制备包括研磨、提取、离心等步骤。色谱条件包括,常用的C18反相色谱柱,柱温在25-35℃。以乙腈,甲醇和水为流动相,有的还会添加缓冲液,比如乙腈和水,并加入一定的冰醋酸,流速为1.0ml/min。紫外检测器,波长根据化合物的性质,选择比较适合目标物质的吸收波长。


2.电化学


电化学方法是基于电化学反应的检测技术,通过测量电化学反应过程中产生的电位变化,来检测信号分子。当植物内发生氧化还原反应,信号分子会携带电荷,忙碌着传递信号。测定反应过程中的电流变化,可以测定中信号的浓度。当植物受到胁迫的时候,会有过氧化氢,一氧化氮的变化,通过电极传感器来测定含量。


3.电泳法


SDS是一种阴离子去污剂,能够将分子内或分子间的氢键断裂,使分子折叠起来,破坏蛋白质分子的二级,三级结构。还原剂如β-巯基乙醇,能够让半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。在样品加入SDS和还原剂,样品中的蛋白质分子的氢键和二硫键发生断裂,蛋白质的氨基酸侧链会和SDS结合,形成带负电的蛋白质-SDS胶束。这个结合体所带电荷就比蛋白质原有的电荷量大,消除了蛋白质的自身的电荷影响,就看分子量大小。利用电泳的方法,根据梯度的标准分子量蛋白的迁移率,能够分离出来,结合标准曲线,计算出样品中蛋白分子量。


操作步骤,包括分离胶制备,样品制备,点样,电泳,固定,染色,脱色等。


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