加盟热线:
400-075-0108

www.sinobestbio.com

优选生物
当前位置:
新闻资讯
NEWS CENTER
总三萜的测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-12-09 | 567 次浏览 | 分享到:
三萜类化合物在植物体内以多种形式存在,包括四环、五环、单环、双环和三环三萜。检测方法包括高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、比色法、薄层色谱法和质谱法。HPLC法通过选择适当的样品、前处理、色谱条件和标准曲线,可准确量化三萜类化合物。比色法利用三萜类化合物与香草醛的反应,通过分光光度计测定吸光度值,适用于批量样品的初步含量判断。气相色谱法通过衍生化处理样品,实现精确的单一三萜类化合物分析。

在植物体内,三萜类化合物一般是以四环三萜,五环三萜存在,也有以单环,双环或三环三萜类形式存在。三萜是由鲨烯经过不同的途径合成,三萜的检测方法有高效液相色谱(HPLC)法,气相色谱(GC)法,比色法,薄层色谱法,质谱法等。


1.高效液相色谱(HPLC)法


前处理:选择适当的样品,比如根茎叶,进行干燥,粉碎。采用甲醇等有机溶剂,超声,离心,萃取,过滤。这些操作步骤,并不是偶然的。对化合物提取是有一定顺序的,依据的,遵循的是化合物的物理和化学性质,尽可能的将目标化合物从粗糙的样品中提取出来,以便于更准确的量化计算。



色谱条件:一般采用C18的色谱柱,柱温35℃。以甲醇和水或甲醇-0.5%醋酸水溶液为流动相,参考设置比例,流速1ml/min。紫外检测器,波长254nm,进样量10ul。通过情况下,紫外检测器的波长范围为200-400nm,根据波长范围,可以确定进样的浓度范围,确保在检测器内能够获得更准确的测定数据。


标准曲线:更重要的是标准曲线,要对标准品进行稀释,稀释的最低点要是检出限的5-10倍。一般情况下,至少要5-7个浓度点。上机测定,记录色谱峰。色谱峰面积,也就是峰的积分面积。根据色谱峰面积和对应的标准溶液浓度,可以绘制出一条标准曲线,得到回归方程,相关吸收r2>0.999,需要关注重复性,回收率。



样品测定:样品的测定,有经验的技术会稀释到最佳的浓度范围。测定的峰,更准确。结合色谱峰面积,回归方程,可计算出样品中的三萜类化合物浓度。过程是这样的过程,其实操作起来并不是简单的。因为要对目标峰进行识别,记录好稀释倍数,在结果计算的时候要考虑的。



2.比色法


三萜类化合物在冰醋酸的环境中,能够和香草醛发生特定的化学反应,产物呈紫红色。颜色的强弱和三萜类化合物含量,也就是浓度呈正比。通过分光光度计,在550nm波长处,可以测定出来吸光度值。采用一系列的标准品,梯度稀释7个点,并测定吸光度值,绘制出标准曲线。对样品进行适当的预处理,并稀释相应的倍数,测定吸光度值,结合标准曲线,得到样品中的三萜类化合物含量。这种方法相对比较粗略,用于批量样品的初步含量判断。




3.气相色谱(GC)法


将样品进行衍生化处理,使其具有挥发性。将处理后的样品,注入到气相色谱仪。色谱柱对样品进行分离,在检测器上测定出色谱峰,计算出样品中组分的含量。衍生化的步骤,是相对繁琐的,一般有标准的方法参考。色谱柱和载气的选择,特别是温度的设置,直接决定了分离效果。使用气相色谱法测定含量,分离效果是非常好的。就是需要衍生化,多用于单一三萜类化合物的精确分析。


服务热线 Online
400-075-0108