亚精胺是生物体通过腐胺和腺苷甲硫氨酸的生物合成，最终合成亚精胺。化学式为C7H19N3，分子量145.2，可溶于水、醇和醚，沸点246.6±8.0℃。亚精胺可抑制神经元合成酶，结合并沉淀DNA；也可用于纯化DNA结合蛋白，刺激T4聚核苷酸激酶活性。从科研的角度来看，亚精胺可以促进细胞增殖，增强DNA的稳定性和柔韧性。

检测样品中的亚精胺含量，常用的方法包括高效液相色谱（HPLC）法、气相色谱（GC）法、质谱（MS）法、荧光光谱法、酶联免疫吸附测定（ELISA）等。

1.高效液相色谱（HPLC）法

样品提取：将样品粉碎研磨，取5g放在50ml离心管中。加入0.4mol/L的高氯酸，振荡萃取5min，静置5min，离心30-35min。接着，用高氯酸溶液提取。衍生化（步骤略），用0.45um过滤。

HPLC色谱条件：采用C18的色谱柱，柱温根据实际情况调整。以甲醇和水为流动相，流速为0.5-1.0ml/min，紫外检测器，波长210-254nm之间，进样量10-20ul。根据样品和设备的情况，选择适当的参数。有文献参考的方法，也有标准的方法，除了验证，还可以自己开发出来一套方法。

标准曲线：将标准品进行梯度的，成倍数的稀释，至少6个浓度点。在适当的HPLC色谱条件下，依次上机测定色谱峰。在测定的过程中，观察出峰的情况。正常的时候，以色谱峰面积为纵坐标，色谱峰对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程，计算回收率。标准曲线的相关系数r2＞0.999，确保重复性在规定的范围内。

样品检测：样品测定过程和标准溶液相似的，不同的是，样品可能需要稀释一定的倍数，让峰在屏幕上有适当的位置，不能过低也不能过高。更重要的是，样品里面的化合物，有可能会影响到出峰的情况。也就是说，标准品出的峰是正常的，而到了样品化合物的时候就变形了。其实，这就是要考虑样品对色谱柱，流动相，检测器等方面的影响，或者温度和进样量等。检测出来的色谱峰，按色谱峰面积和标准曲线，计算出样品中的亚精胺含量。

2.气相色谱（GC）法

开头的时候，我们了解到亚精胺的物理和化学性质，是非常有必要的。在液相的时候，利用它的溶解性能，气相色谱利用的是沸点，通过对温度的控制来调节。载气选择一般会使用高纯度的氦气，流速一般为1ml/min。进样量1-2ul，柱温初始150℃，保持2分钟，以20℃/分钟速率升温至250℃，最后保持5分钟。分流比一般为10:1，进样口温度一般为250℃，火焰离子化检测器（FID）设置为300℃。

采用内标或外标法，一般采用标准曲线的方法测定。

3.质谱（MS）法

质谱一般是和液相或气相联用的，测亚精胺一般用电喷雾离子化方法，质谱分析模式用选择反应监测（SRM）或多反应监测（MRM），在正离子采集模式下。不同浓度的亚精胺标准品，建立标准曲线，以便进行定量分析。标准曲线的相关系数r2＞0.999，以确保结果的准确性。

4.酶联免疫吸附（ELISA）法

采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法。向预包被了抗体的微孔板中，加入标准品和待测样本，温育后，加入生物素标记抗体和过氧化物酶标记的亚精胺。经过温育和洗涤结合形成的免疫复合物，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子浓度呈正相关。最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，通过绘制标准曲线计算出样本亚精胺的浓度。按试剂盒的说明书要求和注意事项，完成操作。