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玉米素核苷含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-12-04 | 188 次浏览 | 分享到:
玉米素核苷是一种植物内源性激素,属于细胞分裂素,主要在植物根部合成,具有促进细胞分裂、刺激茎芽增值、抑制根生长和叶片衰老等作用。其检测方法包括高效液相色谱(HPLC)、液相质谱联用(LC-MS)和酶联免疫分析法(ELISA)。ELISA通过抗体结合反应测定吸光度值,计算含量;HPLC通过样品处理和色谱条件测定色谱峰,绘制标准曲线;LC-MS则在液相色谱分离后通过质谱检测器定性和定量。这些方法确保了玉米素核苷的准确检测和定量分析。

玉米素核苷是一种植物内源性激素,是玉米素的衍生物,属于细胞分裂素,能够促进细胞分裂,主要在植物根部合成。玉米素核苷是从甜玉米灌浆期的籽粒中提取出来的,化学式为C15H21N5O5,分子量为351.36,它的反式异构体具有相对较强的生物活性。不仅能够促进细胞分裂,刺激茎芽增值,抑制根的生长和叶片衰老,还能激活代谢。



检测方法包括高效液相色谱(HPLC)法、液相质谱联用(LC-MS)、酶联免疫分析法(ELISA)等方法测定,线性定量。


1.ELISA


玉米素核苷和特定的抗体发生结合反应,通过酶标仪测定吸光度值,根据标准曲线,计算出样品中的玉米素核苷的含量。检测步骤包括微孔板中加入样品,洗涤,加入酶标二抗,洗涤,显色,终止反应,测定吸光度值。根据说明书的要求和注意事项,逐步完成测定过程。



2.HPLC


样品处理:称取0.5-1g的植物样本,液氮研磨成粉末。加入异丙醇/盐酸缓冲溶液,低温振荡30min,在加入二氯甲烷,低温高速离心,取有机相用甲醇溶解,后用0.45um的微孔滤膜过滤,待测。


色谱条件:C18色谱柱,柱温35℃。乙腈-三乙胺为流动相,根据实验需求梯度洗脱,一般为1ml/min。紫外检测器,波长270nm,进样量10ul。仅供参考,具体要看检测的实际情况。



标准曲线:将标准品进行溶解和稀释,用适当的有机溶剂,成倍的稀释,至少6个梯度点。以上述的色谱条件,依次进样,测定色谱峰,记录数据。根据色谱峰面积,和对应的标准溶液浓度,绘制标准曲线,得到回归方程,确保相关系数,重复率符合要求。同时,计算出回收率。



结果计算:对结果的计算,主要基于标准曲线。对样品的测定条件,是和标准品一样的。这样,才能确保在同样的环境中,获得相对准确的色谱峰。对样品进行必要的稀释,记录稀释倍数,从而能够在色谱图上完整的展示出来。根据回归方程,是可以计算出样品中的玉米素核苷含量的。但是,还要考虑稀释倍数,回收率等。这里,一般都是有专门的公式,顺利的计算出来结果的。


3.LCMS



液相质谱联用,其实就是在液相色谱分离出化合物后,外接了一个质谱检测器。将化合物经过离子源打成碎片,质量检测器上记录碎片峰。质谱峰上的数字,就是质荷比(m/z)。根据对化合物碎片的推断,可以定性出玉米素核苷。同时,通过标准曲线,也可以准确的计算出含量。这种方法更精确,但需要有专业的设备,熟练操作,有效的解析质谱。


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