维生素b3是一种烟酸，化学名为吡啶-3-甲酸，化学式为C6H5NO2。主要是从动物内脏、肌肉组织、水果或白菜中提取出来的一种有机物，是人体必需的维生素之一。它能够提供饲料蛋白的利用率，提升禽兽的肉的产量和质量，也广泛应用在医药中间体，合成多种医药。

检测样本中的维生素b3的含量，主要方法有高效液相色谱（HPLC）法和酶联免疫吸附（ELISA）法

1.酶联免疫吸附（ELISA）法

它的基本原理，就是用抗原和抗体特异性结合，并将这个过程定量化。基本上是通过微孔板进行的，微孔板内包被了维生素b3的捕获抗体。当加入样品，标准品，HRP标记的检测抗体的时候，并在适宜的温度下进行温育反应。让抗体和抗原充分的结合，并连接上检测抗体。只有结合上了检测抗体，才能通过显色剂看出来。这里用的底物是TMB，在过氧化物酶的作用下，会转化为蓝色。此时，加入酸，可以终止反应，显示黄色。颜色的深浅，和维生素b3含量是有线性关系的，通过酶标仪在450nm波长处测定吸光度，制作标准曲线，计算样品中的维生素b3含量。具体操作过程和注意事项，可以参考相关的试剂盒说明书。

2.高效液相色谱（HPLC）法

色谱条件：采用C18反相色谱柱，紫外检测器，波长为260-270nm，根据实际情况调整。流动相一般为甲醇和水，按一定的比例混合，需要验证或开发。流速为1.0ml/min，进样量10-20ul。这个条件仅供参考，为了能够测定出有效的色谱峰，并准确的计算出结果。

标准曲线：它是利用标准品，先配制成溶液。这个时候，标准品用什么稀释是比较关键的。因为它会进入到流动相，如果选择不恰当会和流动相发生反应，很容易影响出峰的情况。梯度稀释至少6个点，为了有比较好的线性，在上述的色谱条件下，上机测定色谱峰。对色谱峰进行积分，以标准品浓度为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程和回收率，确保r2＞0.999，重复性符合要求。

样品测定：对样品的检测，是和标准品方法相同的。不同的是，它测定的过程，需要注意出峰的情况，记录一下稀释倍数。根据色谱峰面积和标准曲线，有相关的公式，可以计算出样品中的维生素b3的含量。注意回收率和稀释倍数，从而计算出相对准确的结果。