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原儿茶酸含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-10-18 | 236 次浏览 | 分享到:
原儿茶酸是一种有机化合物,最早发现于乌蕨和冬青的叶片中,具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗高血糖及神经保护的作用。它广泛存在于多种植物中,如蔬菜、水果、坚果、茶叶等。提取方法包括使用无水乙醇提取紫丁香叶,并通过分液漏斗法进一步纯化。检测方法包括高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)和质谱(MS)等,其中HPLC法常用,需优化色谱条件以确保准确检测。通过外标法制作标准曲线,计算回归方程及相关系数,最终确定样品中原儿茶酸的含量。

原儿茶酸最早发现于鳞始蕨科植物乌蕨和冬青科植物冬青的叶片中,是一种有机化合物。分子式为(HO)2C6H3COOH,分子量154.12。它是一种简单的酚酸,是合成其他复杂分子的前体,例如花青素 3-O-β-D-葡萄糖苷和香兰素。原儿茶酸是复杂多酚类的代谢产物,例如花青素和原花青素。其发现于可食用的蔬菜、水果、坚果、糙米、山核桃、茶叶、木槿花以及一些中草药中。原儿茶酸具有抗菌作用,根据动物实验,具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗高血糖以及神经保护的作用。



从紫丁香叶中提取原儿茶酸:经干燥并通过挑选去除种子及各种杂物,经粉碎机粉碎,得细粉。称取过40目筛的紫丁香叶片粉末2.0g,以无水乙醇为提取剂进行提取。提取液滤过,弃去药渣,回收乙醇,得粗提取物。粗提取物加50ml乙醚和3ml0.1mol/L盐酸,振摇使之溶解,转入分液漏斗中,用0.1mol/L氢氧化钠溶液提取3次。



常见的检测方法,包括高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、质谱(MS)法等。


以高效液相色谱(HPLC)法为例,简单的说明一下。


采用常规的C18色谱柱(4.6mm×250mm, 5μm),柱温35℃;以甲醇-水-冰醋酸或乙腈-水-冰醋酸为流动相,流速1.0ml/min;检测波长260nm,进样量10uL。以上的色谱条件,仅供参考。有的检测含量,需要对色谱条件进行开发,重新确定最佳的色谱条件参数,能够最大程度上分离化合物,并检测出完整有效的色谱峰。外标法,也就是采用至少6个点的标准曲线。对标准品进行梯度稀释6个点,并以上述的色谱条件,进样到hplc中,测定对应的色谱峰。以色谱峰面积为纵坐标,标准品对应浓度为横坐标,制作标准曲线,计算回归方程,相关系数要大于0.999,RSD要小于2%。同时,要计算出回收率。



对样品进行提取并进行适当的稀释,以上述的色谱条件,上机测定色谱峰。如果不能确定浓度范围,多做几个稀释,确保出峰是有效的。并色谱峰面积,以及标准曲线的回归方程,计算出样品中的原儿茶酸含量。要考虑回收率和稀释倍数,计算出最终的含量。


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