鸟氨酸脱羧酶(ODC)催化鸟氨酸生成腐胺,是细胞生长必需的酶。检测ODC含量的方法包括高效液相色谱(HPLC)法和酶联免疫吸附(ELISA)法。HPLC法通过测定腐胺含量间接计算ODC含量,采用C18色谱柱,流动相为甲醇和蒸馏水,检测波长232nm。ELISA法采用双抗体夹心法,通过TMB显色和酶标仪测定吸光度计算样品浓度。
在动物体内,鸟氨酸脱羧酶(ODC)能够催化鸟氨酸进行脱羧反应,生成腐胺。腐胺在丙氨转移酶的作用下,进一步形成精胺。它是细胞生长过程中必需的一种酶,是多胺合成的一个步骤。
检测鸟氨酸脱羧酶(ODC)含量的方法,包括高效液相色谱(HPLC)法和酶联免疫吸附(ELISA)法。
1.高效液相色谱(HPLC)法
色谱条件(仅供参考):采用常规的C18色谱柱,以甲醇和蒸馏水为流动相,流速为1ml/min,检测波长232nm,进样量10-20uL。

样品处理,因为鸟氨酸脱羧酶是和腐胺有直接的对应关系。通过HPLC测腐胺的含量,可以间接的计算出样品中的鸟氨酸脱羧酶的含量。剩下的就是对腐胺的检测,依然采用外标法,也就是标准曲线,通过上述的色谱条件,来测定色谱峰。根据样品的色谱峰,在标准曲线的范围内。标准曲线(相关系数>0.999),RSD<2%,根据回归方程计算样品中的鸟氨酸脱羧酶的含量,考虑回收率和稀释倍数。
2.酶联免疫吸附(ELISA)法
采用双抗体夹心法。往预先包被鸟氨酸脱羧酶(ODC)的特异性抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

检测步骤(参考试剂盒说明书):
1.准备:提前将试剂盒从冰箱中取出,平衡至室温。
2.标准品稀释:按照说明书要求稀释标准品,制备标准品梯度工作液。
3.加样:往预先包被有鸟氨酸脱羧酶(ODC)抗体的微孔中依次加入样本、标准品、标记物抗体等。
4.温育和洗涤:按照说明书要求进行温育和洗涤步骤。
5.显色:加入底物TMB进行显色,TMB在过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
6.测定:用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算样品浓度。