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抗生素的检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-10-18 | 235 次浏览 | 分享到:
抗生素是由微生物或动植物产生的具有抗病原体作用的次生代谢产物,主要通过抑制细菌细胞壁合成、增强细胞膜通透性、干扰蛋白质合成和核酸复制转录来发挥作用。抗生素的过度使用会导致细菌产生抗药性。检测抗生素的方法包括高效液相色谱(HPLC)法、液相质谱联用(LC-MS)法和酶联免疫吸附(ELISA)法。HPLC法通过优化色谱条件如色谱柱、柱温、流动相等来测定抗生素含量,而ELISA法则通过竞争法结合酶标仪检测吸光度来计算抗生素含量。

抗生素是由微生物或动植物在代谢过程中产生的具有抵抗病原体的一类次生代谢产物,能够干扰其他生活细胞发育功能。抗生素具有抑菌或杀菌的作用,主要是通过抑制细菌细胞壁的合成,增强细菌细胞膜的通透性,干扰蛋白质的合成,抑制核酸复制转录。如果利用得当,可以用它来处理不好的细菌。当抗生素使用的过多的时候,就会出现抗药性。也就是说,细菌刚开始不适应,会减少数量。如果没有彻底消除,就会产生抗性,并在抗性的基础上发展壮大。



检测抗生素的方法,包括高效液相色谱(HPLC)法、液相质谱联用(LC-MS)法、酶联免疫吸附(ELISA)法等。


1.高效液相色谱(HPLC)法


HPLC测抗生素含量,色谱条件是比较关键的。主要表现在色谱柱,柱温,流动相,流速,检测器,波长,进样量等方面。比如某种抗生素,可以使用C18的色谱柱,柱温30℃,常用的流动相包括有机溶剂和水溶液,有机溶剂如甲醇和乙腈等。流速1.0mL/min,进样量10-20uL。紫外检测器,波长267nm。这些条件,是为了能够将目标抗生素从样品溶液中尽可能的分离,并在检测器中完整有效展示出来,从而有利于后期的数据处理和结果计算。



抗生素一般是从植物或微生物培养液中提取,提取方法有溶媒萃取法、离子交换法、吸附法、沉淀法等。


标准曲线,通过对标准品进行梯度稀释6个点,以设定的色谱条件,进样测定。出峰后,在计算机软件上记录数据。以标准品溶液的浓度为横坐标,对应的色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程,相关系数r2要>0.999,确保重复性符合要求。同时,还要计算出回收率,方便后期样品检测结果的准确计算。


对样品进行适当的稀释,并依据上述的色谱条件,进样测定色谱峰。以对应的色谱峰面积,结合回归方程,可以计算出样品中的抗生素含量。计算的时候,还要考虑进去回收率和稀释倍数。


2.酶联免疫吸附(ELISA)法



ELISA测抗生素含量,采用的是竞争法。将处理好的样品溶液加入预包被偶联抗原的酶标板中,随后加入辣根酶标记的抗金霉素抗体,该抗体与未与预包被抗原结合的抗体结合,形成抗体-酶标抗体复合物。加入TMB底物后,辣根过氧化物酶催化底物发生显色反应,产生有色产物。通过酶标仪检测有色产物的吸光度(OD值),制作标准曲线。将检测到的样品的吸光度(OD值)结合标准曲线,计算出样品中的抗生素含量。


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