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吲哚-3-甲醛含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-10-17 | 219 次浏览 | 分享到:
吲哚-3-甲醛,又称3-吲哚甲醛,是一种具有抗菌和抗炎作用的生物活性化合物。它通过化学反应和微生物发酵等方法制备,是重要的医药和有机中间体。检测方法包括高效液相色谱(HPLC)和液相质谱联用(LC-MS),其中HPLC常用外标法,通过标准曲线计算含量。LC-MS则结合质谱技术,根据质荷比进行定性定量分析。

吲哚-3-甲醛,又称为3-吲哚甲醛,是一种抗菌、抗炎的生物活性化合物。它是通过化学反应、微生物发酵等方法培养、萃取和浓缩,最终分离出来的。它是重要的医药和有机中间体,可以采用高效液相色谱(HPLC)法和液相质谱联用(LC-MS)法测定。



样品的制备


称取适量新鲜植物样品0.5g,液氮研磨粉碎,加入适当溶剂(异丙醇/盐酸缓冲液),在适宜的温度下,振荡一段时间,使得3-吲哚甲醛充分溶解在溶剂中。加入二氯甲烷等有机溶剂,继续振荡后离心,取下层有机相。避光,用氮气吹干有机相,用适量的甲醇溶解残留物。通过0.45um的微孔滤膜过滤,去除杂质,得到待测液。


高效液相色谱(HPLC)法


HPLC就是利用固定相和流动相之间的分配系数差异,将样品中的化合物逐步分离出来,并在检测器中获得对应的信号。通过和标准品的色谱峰数据对比,从而找到目标产物。或通过调整色谱条件,从而最大程度的获取3-吲哚甲醛的色谱峰。



色谱条件包括色谱柱,柱温,流动相配比,流速,进样量,检测器,波长等。可以选择现成的方法,也有根据实际情况进行开发的,这个决定了对检测的需求。


HPLC检测3-吲哚甲醛,常用的方法就是外标法,也就是采用标准曲线的方式。将标准品进行梯度稀释,并在上述优化的条件下,逐步测定对应的色谱峰。根据峰面积和标准品对应浓度的关系,可以绘制标准曲线,计算出回归方程和回收率。相关系数要符合要求,重复性要在规定的范围内。



对样品进行适当的稀释,从而确保能够在色谱图上获得相对完整的峰。根据标准曲线的回归方程,可以计算出样品中的3-吲哚甲醛的含量,同时考虑稀释倍数和回收率。


LC-MS是在液相色谱分离的基础上,结合质谱技术的检测功能,根据分子的质荷比(m/z)来定性定量测定3-吲哚甲醛。


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