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植物凝集素含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-09-18 | 214 次浏览 | 分享到:
植物凝集素是一种能特异性结合糖蛋白和糖脂的蛋白质,主要存在于植物种子和组织中,具有防御反应和抑制真菌生长的功能。它在生物学研究、医药研发和农业生产中具有重要前景。检测植物凝集素的方法包括糖复合物法、酶联免疫吸附(ELISA)法和红细胞凝集法。糖复合物法通过凝集素与糖复合物的相互作用定量测定其含量;ELISA法利用双抗体夹心法测定凝集素含量;红细胞凝集法则需注意操作方法和精度要求。

植物凝集素是一类具有特异性糖结合活性的蛋白,它能够识别糖蛋白和糖脂,特别是细胞膜中复杂结构的糖链,也就是细胞膜表面决定簇。它可以和外界进入的糖结构结合,干扰外界对植物产生可能的影响,也就是有防御反应。许多植物的凝集素可结合到Glc、Man或Gal的单糖上,尤其对植物中不常见的外来的寡糖具有更高的亲和性。植物凝集素还能够结合真菌细胞,抑制孢子萌发和菌丝体的生长。凝集素主要存在于植物的种子和组织中,它在生物学研究、医药研发、农业生产等领域,具有重要的发展前景。



检测植物凝集素的方法有糖复合物法、酶联免疫吸附(ELISA)法、红细胞凝集法等。


1.糖复合物法


利用植物凝集素能够特异性的结合糖、糖蛋白或糖复合物,并定量测定其含量。因为糖复合物和凝集素的多价糖基结合位点发生相互作用,且生成的结合物在高盐浓度下产生沉淀,后利用离心过滤的方法,将结合物分离出来。最早的时候,是将糖复合物标记在放射性同位素上,通过检测沉淀中的放射性标记强度,确定植物凝集素的含量。



2.酶联免疫吸附(ELISA)法


ELISA采用的是双抗体夹心法,向预先包被植物凝集素捕获抗体包被的96/48微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化作用下转化为蓝色,并在酸的作用下转化为最终的黄色。颜色的深浅和植物凝集素的含量是呈正相关的,可以用酶标仪450nm波长下测定吸光度值,通过标准曲线的方法,计算出样品中的凝集素含量。


还有红细胞凝聚法,在植物凝集素检测的过程中,注意相应的操作方法和精度要求,以经济高效的方式获得准确的测定结果。


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