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三萜皂苷含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-09-13 | 472 次浏览 | 分享到:
皂苷广泛存在于人参、远志等中草药中,其中三萜皂苷是主要成分,具有30个碳原子。三萜皂苷分为四环和五环类型,常见于五加科和伞形科植物。质谱分析显示,具有C-12的三萜皂苷因环乙烯结构易发生RDA裂解,可用于确定A、B环上的取代基。化学反应中,三萜皂苷呈现红色或紫色,通过高效液相色谱(HPLC)和紫外分光光度法可检测其含量。HPLC法使用C18色谱柱,乙腈-水流动相,紫外检测器,波长265nm;紫外分光光度法则通过精密称量标准品,绘制标准曲线,计算样品中三萜皂苷含量。

皂苷主要分布于陆地高等植物,很多中草药比如人参、远志、桔梗、甘草、知母等都含有皂苷。三萜皂苷是指苷元为三萜的一类糖苷,配基是三萜的衍生物,大多是由30个碳原子组成的。同时,三萜皂苷也分为四环三萜和五环三萜,大多存在于五加科和伞形科植物中。三萜皂苷包括的类别比较多,比如鲨烯类、四环三萜、五环三萜、羊毛甾烷等。在质谱图中,具有C-12的三萜皂苷,分子中因具有环乙烯结构,容易发生RDA裂解,根据生成的碎片离子峰可以确定A、B环上的取代基性质、数量和位置。



在试管中,用乙酸酐将少量样品溶解。再加入浓硫酸,可以出现黄-红-紫-蓝-绿色等变化,最后褪色。三萜皂苷只能显示红色或紫色,不能出现绿色。通过这个方法,可以初步判断样本中含有三萜皂苷。


检测方法包括高效液相色谱(HPLC)法和紫外分光光度法。


1.高效液相色谱(HPLC)法


色谱条件的设置,有时候也需要摸方法,比如采用C18的色谱柱,柱温25℃,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0ml/min,紫外检测器,波长265nm,进样量10uL。


检测步骤:样品准备-色谱条件设置-标准品梯度稀释-上机测色谱图-标准曲线制作-样品测定-计算结果。



2.紫外分光光度法


对标准品精密称量,梯度稀释7个点,并加入特定的溶剂和显色剂,用紫外分光光度计,波长268nm测定吸光度值。以浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。测定样品中的三萜皂苷的吸光度值,以空白为对照,重复3次,求取平均值。根据回归方程,计算样品中的三萜皂苷含量。


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