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木聚糖含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-09-10 | 317 次浏览 | 分享到:
木聚糖是一种存在于植物细胞壁中的异质多糖,主要成分是植物半纤维素,化学式为(C5H8O4)n。其分子结构由β-1,4-糖苷键连接的β-D-吡喃木糖组成,并带有4-O-甲基-α-D-葡萄糖醛酸和α-L-阿拉伯糖等侧链。木聚糖不仅存在于植物细胞壁中,还可在菌类和昆虫外骨骼中发现。检测木聚糖的方法包括高效液相色谱(HPLC)法和比色法。HPLC法通过分离木聚糖并制作标准曲线计算含量,而比色法则通过将木聚糖转化为可检测物质,如木糖,生成有色物质后测定吸光度值。比色法包括苯肼比色法和DNS法,后者利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色物质。

木聚糖是一种存在于植物细胞壁中的异质多糖,约占细胞干重的15-35%,是植物半纤维素的主要成分,是一种复杂的多聚五碳糖,化学式为(C5H8O4)n。木聚糖的分子结构由β-1,4-糖苷键将β-D-吡喃木糖连接成多聚物,并且在多聚物主链β-D-吡喃木糖残基的O-2或O-3位置上连有4-O-甲基-α-D-葡萄糖醛酸、α-L-阿拉伯糖等。除了直接从植物细胞壁中提取外,还可以通过微生物的发酵产生木聚糖。除了植物细胞壁,在菌类和昆虫的外骨骼中也有发现木聚糖。在青贮饲料中,玉米、高粱、玉米秸秆等都含有木聚糖。



检测方法很多,常用的有高效液相色谱(HPLC)法,比色法。


1.高效液相色谱(HPLC)法


原理:通过对样品处理,适合的色谱条件下,进样到HPLC,将木聚糖分离并在检测器上读取信号,软件中记录数据和色谱峰。通过制作标准曲线,计算出样品中的木聚糖含量。其中,色谱条件的选择是比较关键的,如采用乙腈和水为流动相,流速1.0mL/min,采用C18色谱柱,柱温30℃,蒸发光散射检测器(ELSD)等。



2.比色法


原理:通过将木聚糖转化为可检测的物质,比如木糖。通过和显色剂反应,生成有色的物质,在紫外分光光度计特定的波长处,测定有色物质的吸光度值。对标准品进行梯度稀释,并上机测定吸光度值,以空白为对照。制作出来的标准曲线,对样品进行提取处理,并上机测定吸光度值,计算出样本中的木聚糖含量。比色法有苯肼比色法、DNS法等,其中,苯肼比色法是将木糖和苯胺在酸性条件下发生反应,生成有色的物质。而DNS法,则是利用还原糖和3,5-而硝基水杨酸分子的硝基还原为橙黄色的3胺基5硝基水杨酸。同样的方法,测定吸光度值,计算样本木聚糖含量。


这种方法相对比较简单,成本也比较低,有的还用试剂盒的方法。如果是试剂盒,需要看清楚试剂盒的操作说明,使用要求以及环境条件等。如果样本的浓度过高,超过了标准曲线的范围,需要对样本进行适当的稀释,确保在标准曲线的范围内,并进行重新测定,计算出最终的木聚糖含量。


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