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绿原酸含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-09-10 | 398 次浏览 | 分享到:
绿原酸是一种具有抗菌、抗病毒、抗氧化作用的有机物,主要来源于金银花、咖啡豆等,化学式为C16H18O9。其提取需使用乙醇、丙酮等极性溶剂,并避免强光和长时间加热。绿原酸在医药、食品、化妆品行业有广泛应用,检测方法包括高效液相色谱(HPLC)法和紫外分光光度法。HPLC法使用C18色谱柱,流动相为甲醇:水:冰醋酸(15:18:1),波长324nm;紫外分光光度法在330nm波长处测定吸光度值,通过标准曲线计算绿原酸含量。

绿原酸是一种有机物,主要来源于金银花、咖啡豆、杜仲叶等,具有抗菌、抗病毒、抗氧化等药理作用。化学式为C16H18O9,易溶于乙醇和丙酮,难溶于三氯甲烷。可以通过乙醇、丙酮、甲醇等极性溶剂提取绿原酸。由于绿原酸对热、光不稳定,在提取的过程中要避免强光和长时间加热,可以避光低温保存。在植物代谢过程中,绿原酸是有氧呼吸莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。绿原酸在医药、食品、化妆品行业得到了广泛的应用,



检测植物样本中的绿原酸含量,通常的方法包括高效液相色谱(HPLC)法、紫外分光光度法等。


1.高效液相色谱(HPLC)法


色谱条件:C18的色谱柱(理论塔板数不低于2000),柱温为室温,紫外检测器,波长324nm,流动相为甲醇:水:冰醋酸(15:18:1),流速为1.0ml/min,进样量20uL。


样本准备:将植物样本剪碎、混匀,取0.5g置于锥形瓶中,加热水40mL溶解,放冷,过滤,置于100mL容量瓶中,用热水洗涤2次,并用水定容到刻度,摇匀过滤备用。


标准品准备:精密称量绿原酸标准品适量,放在棕色瓶中,加水制成10mg/mL的标准溶液。


标准曲线制作:对标准溶液进行梯度稀释,至少6个点,在上述的色谱条件下测定对应的色谱峰。以色谱峰面积为纵坐标,对应标准溶液浓度为横坐标,制作标准曲线,计算回归方程和回收率,注意线性是否符合要求。


样本测定和计算:精密吸取20ul的样本溶液,注入到HPLC中,用紫外检测器324nm测定色谱峰。根据色谱峰面积和上面的标准曲线,计算出样本中的绿原酸含量。



2.紫外分光光度法


精密称量绿原酸标准品,用95%的乙醇溶解,转移到250ml容量瓶中,用95%乙醇定容到刻度,制成1umol/mL的溶液。分别吸取0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1mL到25mL的容量瓶中,加入95%乙醇定容到刻度,作为标准溶液。在紫外分光光度计330nm波长处测定吸光度值,以标准品浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,并求出相应的回归方程。


对待测样品进行相同条件下的测量,记录吸光度值,以空白为对照,多次几次求取平均值。根据标准曲线,可以计算出样本中的绿原酸含量。如果浓度过高,超过了标准曲线范围,考虑进行适当的稀释,并重新测定计算。


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