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甘氨酸含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-09-06 | 262 次浏览 | 分享到:
甘氨酸,化学式为C2H5NO2,是一种非必需氨基酸,具有两个氨基和一个羧基,其侧链仅有一个氢原子。甘氨酸不仅是能量来源,还是肌酸、肝糖原等重要物质的合成原料,参与抗氧化反应,保护细胞免受氧化损伤。甘氨酸主要来源于肉类、鱼类、奶制品、豆类和坚果,也可通过化学合成或生物转化获取。在食品、医药、农业、工业等领域具有重要应用价值。检测甘氨酸含量的方法包括滴定法和高效液相色谱(HPLC)法。滴定法使用高氯酸作为滴定剂,结晶紫为指示剂,通过反应终点颜色变化计算含量。HPLC法采用C18反相色谱柱,以磷酸溶液和乙腈混合作为流动相,通过标准曲线计算甘氨酸含量。

甘氨酸,又名氨基乙酸,是一种非必需氨基酸,化学式为C2H5NO2。甘氨酸是一种最简单的氨基酸,具有两个氨基和一个羧基,其侧链就一个氢原子。甘氨酸不仅能够给我们提供能量,还是一些重要物质的合成原料,比如肌酸、肝糖原等。参与了抗氧化反应,帮助清除体内自由基,保护细胞免受氧化损伤。甘氨酸主要来源于肉类、鱼类、奶制品、豆类和坚果等,可以通过化学合成,也可以采取生物转化的方法获取。甘氨酸在食品、医药、农业、工业等领域,具有重要的应用价值。



检测样本中甘氨酸含量的方法有多种,比如滴定法、高效液相色谱(HPLC)法等。


1.滴定法


氨基酸分子一般是含有氨基和羧基,在水溶液中,它的酸性和碱性趋势比较弱,看不出来是酸的还是碱的。如果是非水介质,比如冰醋酸中,可以用高氯酸作为滴定剂。高氯酸可以和甘氨酸分子中的NH2-基团进行定量反应。结晶紫为指示剂,滴定氨基酸,产物是氨基酸的高氯酸盐。结晶紫在强酸中是绿色的,当和甘氨酸反应结束,pH>3的时候变成紫色,可以作为反应的滴定终点。用空白试验来校正结果,根据滴定液消耗量,计算出样本中的甘氨酸含量。



2.高效液相色谱(HPLC)法


测氨基酸含量,HPLC是一种常见的方法。采用C18反相色谱柱,以磷酸溶液和乙腈按一定比例混合作为流动相。流速1.0ml/min,柱温:40℃,进样量10-20ul,紫外检测器210nm。这个色谱条件是需要参考实验而设置的,也就是开发出最佳的组合,从而能够最大程度上分离并检测出来样本中的甘氨酸。



用pH2.5的磷酸溶液溶解甘氨酸样品,过滤,去除杂质。精准称量甘氨酸标准品,梯度稀释,配制成10,20,40,60,80,100ug/mL的标准溶液,在HPLC上测定,并记录色谱峰和数据。以色谱峰面积为纵坐标,以浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程和回收率。确保数据的重复性和稳定性,在同样的条件下测定样本,并根据测定的色谱峰面积,计算出样本中的甘氨酸含量。


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