二磷酸腺苷是一种核苷酸，是有一分子的腺苷和两个相连的磷酸基团组成的化合物，分子式为C10H15N5O10P2。在生物体内，通常为三磷酸腺苷（ATP）水解失去一个磷酸基团，也就是要断裂一个高能磷酸键，会释放出能量，生成二磷酸腺苷（ADP）。相反，如果是二磷酸腺苷（ADP）要生成三磷酸腺苷（ATP），就需要通过光合作用吸收能量参与合成，即ADP+Pi+能量=ATP+H2O（酶参与，储存能量）。

检测样本中的ADP含量，常用的方法有高效液相色谱（HPLC）法、液相质谱联用（LC-MS）法、酶联免疫吸附（ELISA）法等。

1.高效液相色谱（HPLC）法

样品处理，不同种类的样本处理方法有所差别。比如小鼠组织，在冰浴条件下加入生理盐水研磨，并加入预冷的高氯酸溶液，涡旋混匀，低温离心，用氢氧化钾溶液调节pH到中性，再低温离心取上清液，具体操作步骤参考相关的标准或文献。也有植物二磷酸腺苷的处理，操作方法需要合理有序，避免出错。

采用C18色谱柱，柱温25℃。以磷酸钾缓冲液和乙腈作为流动相，梯度洗脱，流速0.5-1mL/min。采用紫外检测器，波长为254nm，进样量20uL。以外标法测定。

标准曲线，精密称量ADP对照品适量，以磷酸盐缓冲液梯度稀释成6个浓度，取20uL进样，以上述的色谱条件测定，记录色谱峰和数据。以ADP色谱峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，制成标准曲线，计算回归方程和回收率。同时，考虑精密度和稳定性测试。对于样品的测定，以上述的参考条件进行，并记录色谱峰的数据。通过标准曲线，计算样品中的二磷酸腺苷（ADP）含量。

LC-MS是在液相色谱分离目标化合物的同时，在更高灵敏度的质谱仪上测定，根据荷质比确定ADP的含量。

2.酶联免疫吸附（ELISA）法

检测原理：往预先包被二磷酸腺苷(ADP)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的二磷酸腺苷(ADP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品中二磷酸腺苷（ADP）的含量。

操作步骤参考相关的ELISA说明书，阅读试剂盒的存放方法和操作步骤，以及相关注意事项，并按要求处理样品，上机测定。对于影响实验结果的因素，也是需要关心的，比如水浴的温度和时间，在多少时间内完成读数操作。