β胡萝卜素是一种橘黄色的脂溶性化合物,主要存在于植物中,是维生素A的前体。它赋予水果和蔬菜丰富的黄色和橘色,并在食品、饲料、医药和化妆品行业中广泛应用。β胡萝卜素在植物体内通过一系列化学反应生成,最终转化为维生素A。检测β胡萝卜素含量的方法包括高效液相色谱法(HPLC)和分光光度法。HPLC法通过提取和色谱分析来测定β胡萝卜素的含量,而分光光度法则通过测定吸光度来计算其含量。这些方法都需要使用标准溶液来构建标准曲线,以便准确测定样品中的β胡萝卜素含量。
β胡萝卜素是类胡萝卜素的一种橘黄色脂溶性化合物,它在植物中大量存在,是维生素A前体。可以让水果和蔬菜充满了丰富的、饱和的黄色和橘色。溶于二氯甲烷、氯仿、二硫化碳等有机溶剂,在热、氧和光的情况下不稳定。具有着色、抗氧化和营养增强的作用,它被广泛的用在食品、饲料、医药和化妆品行业。β胡萝卜素最主要来源是蔬菜和水果,比如胡萝卜、菠菜、生菜、番薯、哈密瓜、橘子、芒果等,一般情况下,颜色越强烈的水果和蔬菜,β胡萝卜素含量就越丰富。在植物体内,最初由3个乙酰-CoA通过磷酸化、脱羧、异构化、聚合、脱氢、环合等作用生成β胡萝卜素,在代谢的过程中最终会生成维生素A。

检测样本中的β胡萝卜素含量,主要方法有高效液相色谱(HPLC)法、分光光度法、层析法等。
1.高效液相色谱(HPLC)法
从植物中提取β胡萝卜素,要遵循它的物理和化学特征,由于β胡萝卜素不溶于水,而溶于氯仿、石油醚等有机溶剂。因此,以石油醚作为提取剂,并用萃取的方法获得。

色谱条件设置是关键的,一般是对参数进行最优化的设计组合。比如采用C18的反相柱,内径4.6mm,长250mm,粒径5um。以甲醇、乙腈、三氯甲烷等有机溶剂来确定流动相,并根据实际需求配制比例。柱温30℃,流速1.2mL/min,紫外检测器,波长设定450nm,进样量一般为10uL,进样前用0.45um微孔滤膜过滤。
使用β胡萝卜素标准品,梯度稀释,制成不同浓度的标准溶液,用于构建标准曲线。标准溶液的浓度范围应覆盖预期样品中β-胡萝卜素的可能浓度,以便准确测定样品中的β胡萝卜素含量。以浓度为横坐标,以峰面积以为纵坐标,制作标准曲线,计算回归方程和回收率。对样品提取液,以同样的色谱条件,上机测定其色谱峰,并结合标准曲线,计算出样品中的β胡萝卜素含量。
2.分光光度法
检测原理:通过制备β胡萝卜素标准溶液,梯度稀释,测定吸光度值,绘制标准曲线。提取样品中的β葫芦素,在分光光度计452nm波长处测定吸光度,并与标准曲线对比,计算出样品中的β胡萝卜素含量。
标准曲线制作:分别吸取5μg/mLβ-胡萝卜素标准溶液0、0.5、1.5、2.0、2.5、3.0mL标准液于10mL带磨口塞的容量瓶中,用水饱和的正丁酮定容摇匀,得0.0、0.25、0.75、1.00、1.25、1.50μg/mLβ-胡萝卜素标准溶液系列。