1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)是一种信号分子，通过激素与细胞受体结合激活磷酸二酯酶，进而生成IP3和甘油二酯。测定植物体内IP3含量推荐使用酶联免疫吸附（ELISA）法，特别是双抗体夹心法。该方法涉及使用纯化的IP3抗体包被微孔板，加入样品和HRP标记的IP3结合抗体，形成复合产物后通过酶标仪测定吸光度值，从而定量计算IP3含量。操作步骤包括准备试剂、处理样品、执行ELISA反应、绘制标准曲线及计算IP3含量。
1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)是第二信使的信号分子，当激素和细胞上的专一受体结合后，导致1-磷脂酰肌醇4,5-二磷酸磷酸二酯酶的激活，从而使磷脂酰肌醇4,5-二磷酸水解，生成肌醇1,4,5-三磷酸和甘油二酯。
测定植物体内的1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)含量，这里推荐用的是酶联免疫吸附（ELISA）法。
ELISA的方法有双抗体夹心法，也有竞争法。测IP3的含量，用的是双抗体夹心法。用纯化的植物三磷酸肌醇（IP3）抗体包被微孔板，制作成固相抗体。向微孔中依次加入植物1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）的样品，混匀后，加入HRP标记的IP3结合抗体，和包被在微孔内的抗体共同结合在样品中的IP3，形成抗体-抗原-抗体的复合产物。经过彻底洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化作用下，转化为蓝色的络合物。在酸性的条件下，这种有色的溶液会转变为最终的黄色。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，并记录下来，以空白为对照。颜色的深浅和植物1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)的含量成正比的，通过测定溶液的吸光度值，根据标准曲线可以定量计算出样品中的IP3含量。
按照试剂盒说明书准备所需的试剂，包括标准品、洗涤液、显色剂等，并确保所有试剂在使用前已恢复到室温
1.样品处理，将植物组织粉碎、浸提、离心，取上清液备用。
2.根据说明书的操作步骤，按规定的加样和温育次序和时间，完成反应的步骤和测定。
3.绘制标准曲线，以标准品浓度为横坐标，对应吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线并回归方程。
4.根据标准曲线和样本的测定吸光度值（平均值），计算出样本中的IP3含量。
