乳酸是一种α-羟酸,化学式为C3H6O3,通过乳酸脱氢酶的作用从丙酮酸产生。乳酸发酵常用玉米、大米等淀粉为原料。高效液相色谱(HPLC)法是常用的乳酸检测方法,具有高灵敏度和准确性。检测步骤包括样品处理、色谱条件设置、进样测定、标准曲线制作及结果计算。样品经预处理后,通过C18色谱柱和特定流动相进行分离,紫外检测器在210 nm波长下检测,最终根据标准曲线计算乳酸含量。
乳酸是一种羧酸类的有机化合物,化学式为C3H6O3,属于α-羟酸。在发酵的过程中,乳酸脱氢酶发挥重要作用,产生乳酸的过程为:丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD++2H。在一般的新陈代谢和运动过程中,都会有乳酸不断产生。乳酸发酵法的原料一般是玉米、大米、甘薯等淀粉。

检测乳酸的方法,常用的是高效液相色谱(HPLC)法。通过色谱柱的分离,和流动相的洗脱,在检测器上获取信号,计算机软件记录色谱峰图。通过对乳酸色谱峰面积或峰高进行分析,结合标准曲线,回归方程,回收率,计算出样本中的乳酸含量。HPLC的方法具有高灵敏度、高分辨率、高准确性等特点,适合复杂样品中的乳酸含量测定。

检测用设备和试剂:高效液相色谱仪,紫外检测器,色谱柱,超声波清洗器,离心机,pH计,微孔滤膜,容量瓶,移液器等。磷酸缓冲液,乙腈,蒸馏水等。
检测步骤:样品处理-色谱条件设置-进样测定-标准曲线制作-结果计算。

1.样品处理:采用适当的预处理,比如均质、稀释等,将待测样品中的乳酸提取出来,用磷酸二氢钾溶液定容至适当浓度。
2.色谱条件设置:采用C18色谱柱,以甲醇-乙腈-磷酸二氢钾溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,紫外检测器,检测波长为210 nm,进样量通常为20 μL。
3.进样测定:将处理后的样品上机测定,在计算机软件中记录色谱峰和数据。
4.标准曲线制作:标准品梯度稀释至少6个点,上机测定。以浓度为横坐标,以色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程和回收率。
5.结果计算:根据样品溶液测定结果,结合标准曲线,计算出样品中的乳酸的含量。