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橙皮甙含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-08-27 | 206 次浏览 | 分享到:

橙皮甙是什么呢?它是从芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果中提取出来的一种化学成分。由橙皮甙元和芸香糖经过复杂生物反应,脱掉一分子水合成的。其分子式为C28H34O15,分子量610.55。具有抗炎、抗病毒的作用。检测样本中的橙皮甙含量,就用常规的高效液相色谱(HPLC)法,准确可靠。



检测步骤包括样品准备、HPLC色谱条件设置、建立标准曲线,样品测定和计算等。


1.样品准备,将橙皮样品磨碎成细末,准确称量一定量样品,加入甲醇,使用超声波浸提30min,离心10min,吸取上清液用0.45um的微孔滤膜过滤。


2.HPLC色谱条件设置,依然采用优秀的C18色谱柱,用甲醇和水为流动相梯度洗脱,流速1.0ml/min,柱温30℃,紫外检测器,波长280nm。这些条件并不是固定不变的,根据实验条件和设备的变化,参数也会有所调整的,目的是为了将橙皮甙从溶液中尽可能分离出来,并有效的展示在色谱峰上。



3.建立标准曲线,将橙皮甙的标准品进行梯度稀释,至少有6个不同的点,稀释后的浓度是可以计算的。以上述的检测条件,在HPLC上测定其色谱峰。以色谱的峰面积为纵坐标,以浓度为横坐标,绘制标准曲线。标准曲线,要确保有良好的线性关系(R2>0.99),否则会影响计算结果。这是一种外标法,此时也可以根据色谱峰面积,计算一下标准品的回收率。也就是,标准品的标记的理论浓度,和上机测定的浓度存在一定的差值,补偿回来。


4.样品测定和计算,在同样的检测条件下,上机测定样品,在软件中记录并识别色谱峰。根据标准曲线,计算出样品中的橙皮甙含量。如果浓度太高,超过了标准曲线的浓度范围,就要进行适量的稀释。


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