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岩藻糖含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-08-15 | 236 次浏览 | 分享到:

岩藻糖是一种脱氧六碳糖,在哺乳动物,植物细胞和昆虫中,它以单体形式,也可以多糖的形式而存在。在自然界中,岩藻糖大多数是以L-构型。在糖苷类化合物中,也会发现有D构型,但很少。在生理效应方面,它参与了神经传导,具有免疫调节和抗氧化的作用。



检测生物样本中的岩藻糖(L-岩藻糖)含量,主要方法有高效液相色谱(HPLC)法。


HPLC的色谱柱能够将化合物中的L-岩藻糖和其他物质分离开,并由流动相梯度洗脱出来,在检测器中测定其含量,在软件中记录色谱峰,包括峰高和峰面积。通过对色谱峰的数据进行分析,比如制作标准曲线,并计算回归方程,回收率。根据测定样品的峰面积,结合标准曲线的回归方程,可以计算出样品中的L-岩藻糖的含量。这个过程,可以多测几次,以验证HPLC方法的稳定性。



这里有两点需要注意的,就是色谱条件的设置。有的方法是比较成熟,而且有现成的标准可以参考,可以直接设置。但也有很多测定,根据设备和条件的不同,是需要开发和验证的。比如色谱柱规格和型号,流动相的配制和梯度比例,柱温设置,进样量,流速,检测器及波长等因素,都会影响到最终的色谱峰出图和数据结果。因此,需要根据实际的情况,做一个最优化的组合。很多时候,除了参数上的匹配,还需要注意色谱柱是否出现堵塞,流动相是否脱气,管路是否有污染等情况。


进入检测阶段,就要考虑标准曲线。对标准品进行梯度进样,测定出色谱峰。根据峰面积和对应的标准浓度,制作标准曲线,计算回归方程。样品处理要认真的,避免引入新的杂质或损失岩藻糖。进样到色谱仪中,根据设定条件,测定结果。


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