土壤中有许多种酶，磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮、有效磷和pH的显著影响，根据pH范围不同，分为碱性磷酸酶、中性磷酸酶和酸性磷酸酶。碱性磷酸酶就是我们今天研究的对象。碱性磷酸酶主要是由微生物分泌，在土壤中促进有机磷化合物水解，生成磷酸根离子和自由的羟基，为植物提供必要的营养，促进生长发育。

土壤碱性磷酸酶的测定原理：在碱性环境下，土壤碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过分光光度法测定酚的生成量，即可计算出土壤碱性磷酸酶活性。

用电子天平精准称量5g土壤样品，放在50mL的容量瓶中，再加入1mL的甲苯，赶紧塞上塞子。容量瓶在手中，带上塑胶防护手套，轻轻的摇呀摇，现在都有摇床了，设置摇晃15min。拿到桌面上，再加入5mL的磷酸苯二钠和5mL的碱性磷酸酶缓冲液。仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h。之后，加入0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。取0.25mL滤液于25mL容量瓶中，加1.25mL pＨ9.0硼酸盐缓冲液，再加入0.75mL 2.5％的铁氰化钾和0.75mL 0.5％的4－氨基安替吡啉溶液，摇动，仔细混匀，这时溶液呈粉红色，然后加水定容。待颜色稳定时（20-30min），在波长510nm处测定各样品的吸光值。

接着，就要绘制标准曲线。检测土壤碱性磷酸酶，用的是酚为标准工作液。取7个梯度体积的酚溶液，放置到50ml的容量瓶中，每瓶加入对应体积的缓冲液和显色剂，显色后稀释到刻度，30min后等颜色稳定了，上分光光度计测定，波长和样品检测的波长一样。这里需要注意的是，用分光光度计检测，是要有对照的，就用0ml的酚溶液作为对照，其他步骤相同，进行测定。以吸光度值为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制出来标准曲线。

有了标准曲线，就要计算样品中的碱性磷酸酶活性了。