铁离子在细胞中主要以二价铁离子(Fe2+)的形式存在的,具有还原性,是血红蛋白分子的重要组成部分。Fe2+对人体的新陈代谢起着重要的作用,如果Fe2+含量不足,就会造成缺铁性贫血。铁离子在动物体内主要以蛋白质复合物形式存在,很少以离子的形态存在。检测细胞中的Fe2+含量的方法,主要有原子吸收法和比色法等。

检测细胞中的铁离子含量,这里用的是分光光度法,也是以(亚铁嗪法)试剂盒的形式进行。说的是,在酸性介质中,以亚铁嗪为底物,将和铁蛋白结合的血清铁从蛋白中解离出来,再被还原为Fe2+。Fe2+和亚铁嗪反应生成紫红色化合物。通过酶标仪,在562nm波长处,测定吸光度值。对标准品进行梯度稀释,并上机检测吸光度值,制作标准曲线。测定样品的吸光度值,并计算出样品中铁离子的含量。试剂盒的检测,线性范围5~300uM。

操作步骤:样品准备-标准品稀释-混合溶液-60℃孵育1h-冷却离心-加入检测剂,孵育30min-562nm测定吸光度-绘制标准曲线-计算样品铁离子浓度。
注意事项:试剂盒检测细胞铁离子含量,是不受其他离子的干扰,比如镁离子、锰离子等。如果测定的样本浓度高于标准曲线上限,需要对样品进行稀释。