胆固醇是一种环戊烷多氢菲的衍生物,是哺乳动物体内主要的甾体类化合物,在细胞生命活动中起着重要的作用。在血液中,胆固醇通过一系列的酶和代谢途径,参与机体内各种物质的代谢,包括糖、蛋白质、脂肪、矿物质等代谢。

检测样本中胆固醇的含量,主要方法有高效液相色谱(HPLC)法和液质联用(LC-MS)法。这里,简单的介绍一下,以便参考。
HPLC测胆固醇,主要包括样品处理、色谱条件设置、标准曲线绘制、样品检测、结果计算等过程。看起来是比较简单的,其实操作起来,还是非常考验基本功的。操作过程中,要依据相关的规程和标准,有效完成相关的步骤。比如样品的处理,根据不同类型的样品,采用不同的方法,实现提取、纯化等步骤,尽可能的去除杂质,以便于检测出胆固醇的真实含量。

对HPLC仪器的操作,是离不开检测方法的。没有检测方法,仪器也运转不起来。设备的运转,其实也是方法在尽显。它包括了选择适合的色谱柱(如C18),流动相让化合物有序从固定相洗脱出来(如乙腈-甲醇-异丙醇溶液),还必须同时考虑流速、柱温、进样量、检测器波长等参数,以确保胆固醇能够有效得到分离和检测出来。
标准曲线的绘制,是要在色谱峰跑的基本正常的情况下,对标准品进行梯度稀释,并在设置好的色谱条件下测定并记录色谱峰和数据。标准胆固醇的浓度对应峰高或峰面积,一一对应,可以绘制出标准曲线,并计算出回归方程。这个时候,也要计算回收率。这样,才能将这个标准曲线应用到样品检测的计算中。
样品检测和计算,将处理好的样品注入液相色谱仪中,根据设定的色谱条件进行检测,并记录胆固醇的峰面积或峰高。将样品的峰面积或峰高代入标准曲线方程中,计算出样品中胆固醇的浓度。
LC-MS结合了液相色谱的分离能力和质谱的鉴定能力,其基本步骤与HPLC类似,但在检测部分更加复杂和精细。通常包括样品的进样、液相色谱分离、质谱检测和数据分析等步骤。