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植物褪黑素含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-07-30 | 404 次浏览 | 分享到:

褪黑素不仅存在于动物体内,在植物体内也是有发现的。同一个植物在不同位置上,褪黑素的含量也是不同的。一般来说,繁殖器官和花朵中的褪黑素含量较高。褪黑素有什么用呢?它能够使植物的种子免受紫外线、低温等外界因素的侵害。而在合成褪黑素方面,植物和动物差不多。植物中的色氨酸先脱羧生成色胺,再被羧化酶催化,生成5-羟色胺。色胺是吲哚乙酸的前体,可以生成吲哚乙酸。大家都知道,吲哚乙酸就是植物生长素。



检测植物褪黑素含量的方法还是比较多的,比如高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、紫外分光光度法(UV)、酶联免疫法(ELISA)等。下面,简单的介绍一下,需要做实验的,还要认真参考相关的说明和标准。


1.高效液相色谱(HPLC)法


HPLC是检测天然物质成分的有效方法之一,它具有高度灵活性、高灵敏性的特点,长期深受科研检测工作者的青睐。根据物质在固定相和流动相之间的分配系数差异而进行分离,并在对应的检测器上获取信号。通过对信号进行模拟,在软件中记录色谱峰的峰高和峰面积,并对数据进行处理,计算出样品中的褪黑素含量。检测过程包括:样品提取-净化处理-色谱条件设置-上机检测-数据处理。需要注意的是色谱条件,每种物质,甚至不同设备对检测过程都需要进行调试。比如用C18的色谱柱,紫外检测器,波长设置,柱温,流动相,流速和进样量确定,它们直接决定了出峰的情况。如果峰出的不好,计算出来是有难度,或不能准确反应真实结果。标准曲线和回归方程,计算回收率,并计算样品中的褪黑素含量。



2.气相色谱(GC)法


GC用火焰离子化检测器来测植物褪黑素含量,以氦气为载气,用外标法测定。对植物褪黑素进行检测,在色谱柱和流动相之间进行分离,通过检测器来测定数据。为了检测更准确,获取更丰富的结构信息,也可以用质谱(MS)作为检测器。需要注意的是,要对样品进行衍生化处理,用来提高褪黑素的稳定性和挥发性。



3.紫外分光光度法(UV)


褪黑素在特定波长下具有吸收峰,利用紫外分光光度计测定其吸光度,根据标准曲线,计算出褪黑素含量。这种方法操作简单,成本也比较低,适合于含量比较高的样品。如果含量比较低,而且要求比较高,就要考虑用HPLC或GC等方法。


4.酶联免疫吸附(ELISA)法


这个时候采用竞争法的原理,将褪黑素和非褪黑素的抗原竞争性结合在微孔板上的抗体结合位点,褪黑素抗体结合到抗体上的量和样品中的抗原的量是呈线性关系的,洗板,去除游离的褪黑素抗体。结合在抗体上的褪黑素能够和标记物显色出来,通过标准品梯度稀释,测定数据,并制作标准曲线。根据标准曲线,计算出样品中的褪黑素含量。


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