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类胡萝卜素含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-07-29 | 295 次浏览 | 分享到:

类胡萝卜素是一类天然色素的总称,目前已经发现的天然类胡萝卜素有700多种,根据化学结构不同可以分为胡萝卜素和叶黄素。类胡萝卜素广泛的存在动物、高等植物、真菌、藻类的色素中,而它的颜色是因为共轭双键的数目不同而有所变化的,共轭双键越多,颜色就越红。类胡萝卜素是体内维生素A的主要来源,同时还具有抗氧化、免疫调节、延缓衰老的作用,在一定程度上能够保护视力。



检测样品中的类胡萝卜素含量的方法有多种,主要包括高效液相色谱(HPLC)法、分光光度法、夹心法酶联免疫吸附法(ELISA)、液质联用(LC-MS)法等。


1. 高效液相色谱法(HPLC)


检测出样品中的类胡萝卜素含量,HPLC是一种经济实惠、高效准确的方法。它利用了色谱柱的分离功能,流动相从色谱柱中将化合物逐步洗脱出来,从而在检测器中显示出色谱图。根据色谱峰的峰高或峰面积,可以对数据进行分析和判断。使用类胡萝卜素标准品,梯度稀释,测定对应的峰面积,绘制标准曲线,计算回归方程和回收率。在同样的色谱条件下,对样品进行测定,记录色谱峰信息。同时,根据回归方程计算出样品中的类胡萝卜素含量。这种方法应用范围广,比如动物、血清、细胞、植物、细菌、果蔬、土壤、微生物等样本。



2.分光光度法


这是一种相对简单的方法,它利用类胡萝卜素在特定波长下的吸光度,根据标准曲线来确定样品中类胡萝卜素的含量。这种方法只能测量出总胡萝卜素的含量,准确性相对比较低,适合大批量样本的检测。这里需要注意的是,对样本进行处理。如果样本处理不准确,结果更不准确了。比如,采用乙醇提取法,通过分光光度计测定。对标准品进行梯度稀释,并以空白为对照。


3.酶联免疫吸附(ELISA)法



这里采用的是夹心法酶联免疫吸附测定方法,将待测的物质和标准品加入到微孔酶标板内进行测定。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再进行温育和洗涤,去除没有结合的酶结合物。然后,加入底物A、B,和酶结合物同时作用,产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度是呈线性关系的,通过对标准品进行梯度稀释,在酶标仪特定的波长下测定吸光度值。根据对应的浓度关系,制作标准曲线。并根据标准曲线,可以计算出样品中的类胡萝卜素的含量。


4.液质联用(LC-MS)法


LC-MS集合了液相色谱的分离和质谱高分辨的优点,准确度更高,能够同时实现类胡萝卜素的定性和定量分析。这种方法,能够精确测定和判断分子结构和含量,但需要有专业的技术和设备来完成。


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