细胞分裂素是一类植物激素,它能够促进细胞分裂,并诱导根系发芽和植株生长。它主要分布在植物的根尖、茎尖、未成熟的种子、刚萌发的种子、正在生长的果实内部。植物体内天然的细胞分裂素有玉米素、二氢玉米素、异戊烯腺嘌呤、玉米素核苷、异戊烯腺苷等。植物中的细胞分裂素在根尖内合成,通过木质部转运到地上的部分。主要代谢反应有:从碱基形成核苷和核苷酸、葡萄糖基化、甲硫基化、嘌呤环侧链分裂和嘌呤环分解。细胞分裂素和细胞的分裂密切相关,研究发现,在拟南芥的根系中,细胞分裂素通过控制拟南芥主根分生组织区的细胞分化速度,来影响分生组织区的大小。

检测植物细胞分裂素的方法,主要包括高效液相色谱(HPLC)法、酶联免疫吸附(ELISA)法等。这里简单的介绍一下,
1.高效液相色谱(HPLC)法
取新鲜的植物组织,要新鲜的,细胞分裂素比较多。在液氮中冷冻,并将冷冻组织取出来研磨成粉末,并在甲醇:氯仿:甲酸混合溶液中匀浆,离心提取上清液,除去有机溶剂,可以获得细胞分裂素提取物,并对其进行纯化处理。

HPLC检测细胞分裂素,色谱条件是必须的,也是必要的。比如C18的色谱柱,乙腈-三乙胺缓冲液为流动相,梯度洗脱,柱温35℃,检测波长270nm,进样量10ul等。
标准曲线的制作:测定细胞分裂素含量,这里用到外标法。
细胞分裂素是一类物质,它包含了玉米素、玉米素核苷、6-r,r-二甲基烯丙基氨基嘌呤和6-r,r-二甲基烯丙基氨基嘌呤核苷。那就用这4种物质的标准品,分别进行梯度稀释5个不同的点,按上述的色谱条件,进样测定并记录色谱图和数据。以色谱峰面积为纵坐标,对应的浓度为横坐标,绘制标准曲线。
对样品进行上机检测,根据情况可以做样本平行,对检测结果求取平均值。根据标准曲线,可以计算出样品中的细胞分裂素含量。但是,这个时候要注意一个问题,就是一定要考虑上回收率,数据才相对准确。
2.酶联免疫吸附(ELISA)法

ELISA是采用双抗体夹心法测定样品中的细胞分裂素含量。用植物细胞分裂素捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入细胞分裂素,再和HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化为蓝色,并在酸的作用下终止为黄色。颜色的深浅和样品中的植物细胞分裂素浓度成线性关系,在酶标仪450nm波长下测定吸光度值,并通过标准曲线计算样品中植物细胞分裂素的含量。