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异槲皮苷含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-07-26 | 221 次浏览 | 分享到:

异槲皮苷又称罗布麻甲素,槲皮素-3-O-葡萄糖苷,属于黄酮类化合物。主要存在于砂仁、桑叶、罗布麻、田基黄、辣木叶、鬼针草、青钱柳叶等多种药用植物中,异槲皮苷具有许多的药理作用,比如镇静、降血压等。异槲皮苷具有活性氧自由基和抗氧化作用,活性氧自由基在生物体内参与氧代谢,具有很高的反应活性,能清除体内多余的自由基。



检测样品中异槲皮苷含量,常用的方法包括高效液相色谱(HPLC)法。这是一种高灵敏度的方法,它重现性好,稳定性强,检测效率高,色谱分析准确。下面呢,我们就稍微提一下HPLC检测方法。


准备:这里需要确认的是HPLC的设备和系统运行,配备必要的色谱柱,比如C18的柱子,紫外检测器。对于流动相,要选择对应纯度的试剂,比如甲醇、乙腈等。异槲皮素对照品肯定是需要的,在做标准曲线的时候,需要对标准品进行梯度稀释,并进样检测色谱峰,通过峰面积对浓度进行对照,制作标准曲线,计算回归方程。



样品处理:精密称量适当重量的异槲皮素样品和对照品,用50%甲醇分别制成20ug/mL的溶液。


色谱条件:准备了以上的设备和溶剂,就要进行最优化的设计组合。也就是将色谱柱、流动相、流速、柱温、检测波长、进样量等参数,组合起来能够达到最佳的色谱分析效果的条件。比如,A-0.1%甲酸水与B-乙腈的混合液,通过梯度洗脱或等度洗脱方式进行;流速1ml/min,柱温30℃,紫外波长354nm,进样量20ul。


检测和分析:


在设定的色谱条件下,异槲皮素和其他化合物在色谱柱上得到分离,并在流动相作用下洗脱出来,通过检测器获取信号,模拟成色谱图和数据。根据色谱图上的峰面积或峰高,结合对照品的浓度,也就是回收率,可以计算出样品中的异槲皮素含量。


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