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花青素还原酶检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-07-18 | 169 次浏览 | 分享到:

植物花青素还原酶是原花青素合成途径的关键酶之一,它可以使花色素转变为相应的相应的顺式黄烷-3-醇。此举,有利于植物体内类黄酮物质的合成,以及花色苷的积累。检测样品中花青素还原酶含量,有两种方法。一种是比色法,花青素还原酶能够催化NADPH和花色素转化为黄烷-3-醇和NADP+,NADPH在340nm的地方有吸收峰,而NADP+没有。此时,在340nm的检测波长处,测定NADPH的下降速率,就可以计算出样品中的花青素还原酶含量了。



这里还有一种方法,就是酶联免疫吸附(ELISA)法。将待测的样品的标准品和样品,加入到微孔板的微孔内进行测定。先将待测物质和生物素标记的抗体结合,并同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除没有结合的酶结合物。最后,加入底物A、B、和酶结合物。反应后,会产生颜色。这个颜色的深浅与待测物的浓度是有线性关系的,可以根据标准品测定的线性关系,制作出标准曲线。根据样品的检测数据,结合标准曲线,可以计算出样品中的花青素还原酶含量。



ELISA试剂盒,要先看一下说明书。试剂盒有保存方法和有效期,确保它在使用之前和使用中都是有效、可靠的。在使用之前,有的需要平衡到室温状态。样本和标准品稀释方式和吸取量,都有详细的要求,这里就不一一描述了。



需要注意的是,在酶标仪450nm波长处读取数据,以吸光度为纵坐标,以标准品为横坐标,制作标准曲线。样品要恰当处理,并按步骤检测,根据酶标仪测定的数据,结合标准曲线,可以计算样品中所含有的花青素还原酶含量。说明书,其实也是在考验做实验的基本功了。如果基础不扎实,对说明书的要求也会放松,认真按顺序去完成即可。


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