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丁酸含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-07-18 | 561 次浏览 | 分享到:

丁酸是直链饱和脂肪酸,也是短链脂肪酸,化学式为CH3(CH2)2COOH,分子量:88.11,能够溶于水、乙醇和乙醚等。天然的丁酸存在与香茅、肉豆蔻、奶油等中,可以做食用香料、水果香精,也可以作为萃取剂,用于制备丁酸脂类化合物。丁酸可以发生脱水、酯化、α-H、脱羧等反应。在动物脂肪和植物油中以丁酸酯形式存在,在工业上用蔗糖或淀粉发酵的形式来获取丁酸。



检测样本中的丁酸含量,方法还是比较多的。通常情况下,采用的是高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、液质联用(LC-MS)法、气质联用(GC-MS)法、比色法等。方法虽多,但道理是一样的。这里我们简单的介绍一下,根据需求来选择对应的方法。


1.高效液相色谱(HPLC)法


从样本溶液中将丁酸分离出来,这主要靠色谱柱和流动相。选择适当的色谱柱,可以让混合物中的丁酸和其他物质分离开来,这里用一般的C18色谱柱。流动相的话,就是将色谱柱上的丁酸,冲洗出来并进入检测器获取对应的信号,从而转化成有效的图谱和数据。因此,流动相就要尽可能的将丁酸洗脱出来,这里用的是甲醇-水混合溶剂。在色谱条件设置的时候,还有很多其他因素和参数影响到检测结果,比如柱温、进样量、流速、检测器等。



选择最佳的色谱条件,其实并不是容易得事情。如果有现成的方法或标准,那就直接操作就行了。如果要对方法开发,那就要最优化设计,从而确保能够最大程度上检测出结果。说来话长了,这里先说检测步骤吧。样品的准备是不可忽略的,如果样品处理不恰当,结果会出现较大的偏差的。因此,这个前期处理是需要认真核对,去除杂质,粉碎成末,并加入适当的溶剂萃取。接着要绘制标准曲线,对标准品实现梯度稀释,并进样到色谱系统,测定它们的峰面积并绘制标准曲线。接着,将待测样品注入到液相色谱,测定色谱峰高和峰面积,根据标准曲线计算出样品中丁酸含量。需要测重复性,稳定性,回收率等。也可以先测样品,再测标准品,避免出现色谱柱被标准品污染的情况。


2.气相色谱(GC)法


气相色谱是利用惰性气体为流动相,以色谱柱来分离混合物中的丁酸,通过检测器来获取信号并读取数据。就是通过加热的方法,将温度升高到丁酸的沸点左右,跟着气体一起进入到检测器。样本的准备,和HPLC是相似的。色谱柱和条件的选择是不同的,色谱柱是用毛细管色谱柱,以氮气为载气,流速为1.0mL/min。准备不同浓度的丁酸标准溶液,并进样检测,根据色谱检测数据绘制标准曲线。对样品进行检测,记录色谱图和数据,并根据标准曲线,计算样品中含有的丁酸含量。



此外,还有LC-MS和GC-MS检测法,这两种方法搭载了高灵敏度的质谱检测器,更深入、更准确对丁酸进行定性和定量分析。不过,检测精度越高,成本也相应增加了。随着科技的发展,也可以采用试剂盒的方法测定。


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