花生四烯酸(AA)是一种ω-6多不饱和脂肪酸,是花生油中饱和的花生酸的相对物。化学式为C20H32O2,分子量304.5,结构式CH3(CH2)4(CH=CHCH2)4,全顺式-5,8,11,14-二十碳四烯酸。紫外线吸收峰为257nm,268nm,315nm。

花生四烯酸是细胞的重要组成,它以磷脂的形式存在机体各个组织的细胞膜磷脂上,决定了细胞膜的生物活性。在哺乳动物体内,花生四烯酸只能通过亚油酸代谢而获得,而亚油酸又不能自我合成,只能通过外在的膳食摄取,并通过代谢途径合成。花生四烯酸的分子含有四个不饱和双键,在空气中暴露的时候,很容易就会被氧化降解。

检测样品中花生四烯酸含量,方法还是比较灵活的。常见的有气相色谱(GC)法、气质联用(GC-MS)法、高效液相色谱(HPLC)法、酶联免疫吸附(ELISA)法等。
1.HPLC
HPLC是常用的方法,它适用于多种物质的检测,比如氨基酸、维生素、脂肪酸等,能够较为准确的、精准的测定出花生四烯酸的含量。LC-MS和GC-MS则是更为灵敏的测定方法,它适合于脂肪酸代谢物、植物激素等物质的精准检测,通过分子量和结构形式定性测定,并计算出样品中化合物的含量。

2.GC
使用GC检测花生四烯酸,需要先将样品加入到乙醇中,离心后取上清液,用氮吹到干燥,再加入直链饱和混合脂肪酸。将经过前处理的样品注入气相色谱仪中进行检测,检测条件是必备的。如果不知道检测条件,就是两眼一抹黑,什么都做不了。可以参考相关的检测标准,也可以通过最优化设计实验方案来确定。举例来说,柱子采用DB-WAX,柱长30m,内径0.25um,膜厚0.25um;进口温度为250℃,柱温70℃,温度升高速率4℃/min,保温10min,FID检测器,检测温度250℃。进样量为1uL,氢气速率30mL/min,空气流速300mL/min,氮气场强20mL/min进行测定。根据测定的峰值,计算出样品中的花生四烯酸含量。

3.ELISA
这里用的是试剂盒的方法,具体步骤可以参考说明书。以小鼠花生四烯酸检测为例,往预先包被AA捕获抗体的微孔中依次加入样本溶液、标准品、HRP标记的检测抗体。经过温浴和洗涤,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转变为蓝色,并在酸的作用下显示未黄色。颜色的深浅和AA的含量是有正相关的线性关系的。用酶标仪,在450nm波长处,测吸光度值。根据标准品的吸光度值,绘制标准曲线;根据样品的吸光度值,计算出样品中的AA含量。