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粗多糖含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-07-05 | 213 次浏览 | 分享到:

粗多糖,其实是一种复合型的杂多糖,主要有粘多糖、脂多糖、结合多糖等。有利于促进双歧杆菌的增值、抑制病原菌、增强免疫力等作用。检测样品中的粗多糖含量,这里推荐的一种方法是比色法。



检测原理:多糖在浓硫酸的作用下,可以水解为单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物。衍生物和苯酚缩合形成橙黄色化合物。在一定的浓度范围内,其颜色的深浅和糖的含量是呈线性关系的。通过比色法测定吸光度值,根据标准曲线,可以计算出粗多糖的含量。以下方法,仅供参考;如需检测,按标准操作流程进行。


1.样品处理


先提取,称取5g样品,加入100ml蒸馏水,沸水浴保持2h,冷却到室温,定容到200ml,混匀后过滤,丢弃过滤液,收集余下的滤液。吸取以上的滤液100ml,放到烧杯中,加热浓缩到10ml,冷却后,加入无水乙醇40ml,在3000rpm离心5min,丢弃上清液,剩下残渣。将残渣用水溶解,定容到50ml,混匀过滤。取滤液2ml,加入氢氧化钠2.0ml,Cu溶液2.0ml,沸水浴2min,冷却后3000rpm离心5min,弃上清,剩残渣。将上述残渣用2.0ml硫酸溶解,定容到100ml。吸取2.0ml,放置在25ml比色管中,加入1.0ml苯酚,10ml浓硫酸,沸水浴2min,冷却比色。



2.标准曲线的绘制


这里说的不是怎么绘制,而且实验过程。可以用葡聚糖或葡萄糖作为标准品,依次进行梯度稀释。比如分别吸取0、0.2mL、0.4ml、0. 6ml、 0. 8mL 、1.0ml,标准葡萄糖工作液于 20mL 的比色管,各补水1mL,然后,迅速各加入 5% 苯酚溶液 1.0ml,静置10min 后,用漩涡振荡器使反应液充分摇匀,30度 热水浴中反应 20min,室温下在 485nm 处,以试剂空白溶液为参比,分别测其吸光度。



3.结果计算


根据标准曲线,可以计算出样品中的粗多糖含量。


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