作为科研检测的实验动物小鼠，要检测它体内的游离脂肪酸。现在，为了更快捷的测定含量，通常会使用elisa试剂盒的方法。这种试剂盒，是采用双抗体夹心的方法来测定小鼠体内游离脂肪酸含量。所谓双抗体夹心法，就是抗体-抗原-酶标抗体复合物的形式，经过温浴和洗涤后，加底物TMB，在酶的催化作用下转化为稳定的蓝色。

然后，在脂肪酸的作用下最终变成黄色。其实，颜色的变化就是反应的进行。通过颜色的变化来确定反应的程度，这是有一定的关联的。这些反应都是在酶标板的孔径内完成的，然后在酶标仪上读数。根据elisa试剂盒使用说明，选择450nm波长下测定吸光度。通过对标准参照的稀释和测定，形成一条信号值和梯度浓度的标准曲线，根据标曲可以计算出小鼠游离脂肪酸的含量。

根据说明书的要求，标准品是要进行梯度稀释的。比如第二孔加入100ul标准品，然后加50ul稀释液，混匀之后，这里就有约150ul了。然后，从这第二孔混匀的、稀释的标准品中吸取100ul，再加到第三孔内。第三孔内，再加入50ul稀释液，继续混匀，以此类推。第一孔一般是作为空白对照来使用的，经常会采用5个不同的浓度点来制作标曲。加样的时候，移液器的吸头加入孔的底部，尽量减少和孔壁的接触。轻轻摇匀，有的酶标仪上有震动或加热装置。温浴的时候，采用封板膜封住板子，如果不封的话，可能时间长了就会蒸发很多，到时候数据不稳定。37℃温浴30分钟，这个时间要把握好，如果延长了或不够，都会导致实验反应不完善，结果有可能出现偏差。看起来，这是外围的操作，其实很大程度上决定了数据的结果。

在整个elisa反应的过程中，时间和温度是最为关键的。温度决定了反应是否彻底，能否真实反应了游离脂肪酸的作用。找到最终反应的时间，才能在那个关键时间段测出准确的结果。