丹皮酚是从毛茛科植物牡丹干燥的根皮中提取出来的一种有机化合物,根据药理药效研究证明,丹皮酚具有镇痛、抗炎、解热、降压等作用。在实验的过程中,准确检测丹皮酚的含量,对数据分析具有重要的意义。获得检测数据是科研的基础,是检测过程的结束,也是科研工作的开始。检测样品中的丹皮酚含量,常用的方法是高效液相色谱(HPLC)法,这里简单的介绍一下,希望有所参考和帮助,如果有遗漏和不足之处,希望可以相互学习。

HPLC测植物中的丹皮酚含量,主要包括试剂和设备、样品制备、HPLC调试和检测,标准曲线制作、计算结果和分析等过程。熟悉HPLC的操作的技术对色谱条件是非常重视的,C18的色谱柱可以分离出样品中丹皮酚,以甲醇和水为流动相,选择紫外检测器并设置最佳波长,比如274nm。柱温35℃,并确定最佳的进样量和流速。根据设备和材料,如果跟标准的方法有不同,就可能需要重新进行验证。

标准曲线制作:做液相检测含量,基本上都需要做标曲的。精确称量丹皮酚的标准品,如果称量的过程少了或多了,标曲就会发生变化,因此操作的过程对实验基本功还是有要求的。用蒸馏水对标准品进行梯度稀释,能够有6个不同的标准浓度,目的是能在检测器上获得对应的色谱峰。峰值和浓度是呈对应关系的,以峰面积积分值对浓度进行回归,绘制标准曲线。

对样品进行处理,这一步看起来是准备工作,其实是很重要的。很多时候,我们发现检测结果有偏差,却又找不到原因,可能需要从最基础的样品处理关注起来。样品处理真的是“差之毫厘,谬以千里”,如果处理不到位而造成浓度偏低,如果称量多了可能会偏大。当然,检测过程中的方法,对图谱的分析,数据计算也是很关键的。对样品的处理,有标准的操作要求,在和标准品检测相同的条件下上机测定,通过外标法计算出丹皮酚的含量。