在人体必需氨基酸中,有一个特殊的氨基酸,就是色氨酸,又称为β-吲哚基丙氨酸。它是植物体内生长素生物合成重要的前体物质,结构和IAA相似,在高等植物中普遍存在。色氨酸首先脱氨氧化形成吲哚丙酮,再脱羧形成吲哚乙醛;在催化氧化成吲哚乙酸,这就是生长素了。它是有机物,在水中不怎么溶解,在乙醇中也不太好溶,氯仿更不用说了。但是,它能在甲酸中溶解。色氨酸在人体内有可大的作用了,它改善了人体的睡眠质量,调节了不愉快的情绪。研究色氨酸,对于生物、医学等领域,还是有重要的价值和意义的。

检测色氨酸,就要找到它的特征,才能从样品中发现它的含量。就目前来说,检测它的方法有分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、荧光法等。
1.分光光度法
色氨酸并不是在样品中独立存在的,将样品进行水解。样品中的蛋白质会降解为多肽和游离氨基酸,在酸性介质中,氧化剂的作用下,色氨酸吲哚环和对二氨基苯甲醛发生反应,生成蓝色的化合物,在一定范围内颜色深浅和色氨酸的含量是呈线性正比关系的。通过对梯度稀释标准品在分光光度计最佳波长处测定吸光度值,以浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制出标准曲线,或计算出回归方程。对样品进行处理并上机检测,结合标准曲线和样品的吸光度值,可以计算出色氨酸的含量。

2.高效液相色谱(HPLC)法
检测色氨酸,色谱条件是比较关键的。如果有现成的方法,也要进行测试一下,看是否满足需求。参考比如,使用C18的色谱柱,以甲醇+0.1%磷酸溶液为流动相,在系统中设置1ml/min的流速,柱温是不能忽略的,通常可以设置35℃,检测波长280nm。
标准曲线的制作:标准曲线就是一把尺子,精密的吸取色氨酸标准溶液(需要提前按要求配制)1.0,5.0,10.0ml,分别置于100ml的容量瓶中,用水定容到100mL,摇匀。分别取10ul标准溶液进样检测,以测定色氨酸的峰面积,对色氨酸浓度绘制标准曲线。

样品的测定:取样品溶液10uL,进样到HPLC中测定,根据色谱峰保留时间,外标法定量检测。
结果计算:根据样品的色谱峰面积,由标准曲线回归方程中得到样品中色氨酸的含量。